精子活體染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠前動力蛋白2(PK2)試劑盒Anti-MSLN Antibody(0312)磷酸化鋅指蛋白36抗體
豚鼠蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)試劑盒Anti-MST1 Antibody鋅指蛋白347抗體
豚鼠胰島素(INS)試劑盒Anti-MT-CO1 Antibody鋅指蛋白BED5抗體
豚鼠半胱天冬酶1(CASP1)試劑盒Anti-MT-CO1 Antibody

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：細胞染色

儲存條件：室溫,12個月

用途：評估精子存活率,鑒別不活動精子膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

南沙參（標準品） Triflumuron磷化GADD153抗體包裝250mg

南山楂（標準品） PencycuronG蛋白αS抗體（鳥核苷結(jié)合蛋白Gα s）包裝1g

南五味子（標準品） Hexythiazox solutionG蛋白β4抗體/鳥核苷結(jié)合蛋白β亞基4包裝250mg

鬧羊花II Hexythiazox solutionG蛋白β2抗體/鳥核苷結(jié)合蛋白β亞基2包裝1g

鬧羊花III Imazalil solutionG蛋白γ2抗體/鳥核苷結(jié)合蛋白γ2抗體包裝5g

鬧羊花V Siduron磷化糖原合激3β抗體包裝100g

鬧洋花（標準品） SimazineG蛋白偶聯(lián)受體GPR92蛋白抗體包裝25g

擬人參皂苷F11(標準品) Simazine solution己糖6磷脫氫抗體包裝500g

擬人參皂苷Rh2(標準品)  Phoxim solutionG蛋白偶聯(lián)受體γ14抗體包裝5g

擬人參皂苷RT5(標準品) Phoxim solution腸高血糖相關(guān)肽抗體包裝100g

鳥苷 Pirimicarb solution葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白10抗體包裝25g

尿囊（標準品） Pyrazosulfuron腸高血糖相關(guān)肽抗體包裝500g

檸檬苦，黃柏內(nèi)酯(標準品,橙皮提取) PretilachlorG蛋白偶聯(lián)受體120抗體包裝1g

檸檬苦；吳茱萸內(nèi)酯(標準品,吳茱萸提取) Pretilachlor solutionG蛋白偶聯(lián)受體40抗體包裝25g

牛白藤（標準品） Propoxur solution20號染色體開放閱讀框100抗體包裝5g

克魯弗酵母克魯弗變種Saccharomyces│kluyveri var. kluyveri 質(zhì)量規(guī)格：標準品,用于含量測定皮膚淋巴相關(guān)抗原試劑盒木犀草苷;Cynaroside

枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus│subtilis subsp. subtilis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,JP16皮膚蛋白試劑盒迷迭香;Rosmarinic acid

: Yt17資源名稱: 假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP34,BR,可用于培養(yǎng)皮動蛋白試劑盒牡荊;Vitexin
精子活體染色液ompF(putative outer membrane porin F protein)  小腸結(jié)腸炎耶爾森氏jun膜通道蛋白抗原規(guī)格： 0.5mg

OLFM1 peptide  嗅球蛋白1多肽抗原規(guī)格： 0.5ml

ORX-A(orexin-A)  增食欲su-A/欲激suA抗原規(guī)格： 0.5mg

OTR(oxytocin receptor)  縮宮su受體規(guī)格： 0.5mg

OXR (Orexin receptor)  食欲su受體(多肽)規(guī)格： 0.5mg

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。