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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2003 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 胎盤組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞 | 商品貨號 | A01X2003 |
組織來源 | 胎盤組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可3-5代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
包被條件： PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基：MSCM基礎培養(yǎng)基，F(xiàn)BS，Penicillin，Streptomycin等；
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞分離自胎盤組織；絨毛膜是構成胎盤的胎兒部分，占妊娠胎盤的主要部分。妊娠足月胎盤的絨毛滋養(yǎng)層主要由合體滋養(yǎng)細胞組成，細胞滋養(yǎng)細胞僅散在可見，滋養(yǎng)層的內層為基底膜。滋養(yǎng)層細胞增殖、功能調節(jié)失常與多種妊娠相關疾病的發(fā)生發(fā)展有密切關系；絨毛膜滋養(yǎng)層細胞是構成胎盤屏障的主要組織結構，而胎盤是妊娠期間具有物質交換與代謝，分泌激素和防御等功能的重要器官。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈梭形、多角形，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠心房心肌細胞
小鼠心肌成纖維細胞
小鼠心肌干細胞
小鼠心肌細胞
小鼠心室心肌細胞
小鼠心臟微血管內皮細胞
小鼠星形膠質細胞
小鼠杏仁核神經(jīng)元細胞
小鼠胸腺成纖維細胞
小鼠胸腺基質細胞
小鼠胸腺上皮細胞
小鼠胸主動脈平滑肌細胞
小鼠嗅鞘細胞
小鼠嗅球神經(jīng)干細胞
小鼠雪旺細胞
單增李斯特菌核檢測試劑盒
大腸埃希氏菌 O157:H7 核檢測試劑盒
霍亂弧菌 O1 核檢測試劑盒
霍亂弧菌 O139 核檢測試劑盒
溶藻弧菌核檢測試劑盒
小腸結腸耶爾森菌核檢測試劑盒
諾如病毒 G Ⅱ型核檢測試劑盒
霍亂弧菌 O1/O139 核檢測試劑盒(干燥型 / 雙重熒光 PCR 法)
沙門氏菌 / 志賀氏菌核檢測試劑盒(干燥型 / 雙重熒光 PCR 法)
甲型 / 乙型流感病毒核檢測試劑盒(干燥型 / 雙重熒光 PCR 法)
小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞tNOS基因核檢測試劑盒（恒溫熒光法）
pCaMV35S基因核檢測試劑盒（恒溫熒光法）
pFMV35S基因核檢測試劑盒（恒溫熒光法）
NPTII基因核檢測試劑盒（恒溫熒光法）
PAT基因核檢測試劑盒（恒溫熒光法）
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