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            上海乾思生物科技有限公司

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            人生長(zhǎng)激素釋放肽試劑盒

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            品       牌:其他品牌

            廠商性質(zhì):生產(chǎn)商

            所  在  地:上海市

            更新時(shí)間:2025-03-11 12:31:30瀏覽次數(shù):691

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            人生長(zhǎng)激素釋放肽試劑盒,是一類用于檢測(cè)生物樣本中 ghrelin 含量的工具,在科研及部分臨床診斷輔助方面發(fā)揮重要作用 。

            人生長(zhǎng)激素釋放肽試劑盒

            人生長(zhǎng)激素釋放肽試劑盒,是一類用于檢測(cè)生物樣本中 ghrelin 含量的工具,在科研及部分臨床診斷輔助方面發(fā)揮重要作用 。


            1. 檢測(cè)原理:多采用酶聯(lián)免疫法中的雙抗夾心法。以純化的人生長(zhǎng)激素釋放肽抗體包被微孔板,制成固相抗體。加入樣本后,樣本中的人生長(zhǎng)激素釋放肽與固相抗體結(jié)合,接著加入 HRP 標(biāo)記的人生長(zhǎng)激素釋放肽抗體,形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過(guò)洗滌去除未結(jié)合物質(zhì),再加入底物 TMB 。在 HRP 酶的催化下,TMB 轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,并在酸作用下變?yōu)辄S色,顏色深淺與樣本中人生長(zhǎng)激素釋放肽含量正相關(guān),通過(guò)酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(OD 值),依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出其含量 。

            2. 樣本類型

              • 血清:全血樣品室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜后,以 1000×g 離心 20 分鐘,取上清用于檢測(cè)。收集血液需用一次性無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素試管 。

              • 血漿:常用 EDTA 或肝素抗凝,樣品采集后 30 分鐘內(nèi),在 2 - 8℃以 1000×g 離心 15 分鐘,取上清。

              • 組織勻漿:用預(yù)冷的 PBS(0.01M,pH = 7.4)沖洗組織,去除殘留血液(因勻漿中裂解紅細(xì)胞會(huì)干擾測(cè)量),稱重后剪碎組織。按約 1:9 的重量體積比(如 1g 組織對(duì)應(yīng) 9mL PBS,可按需調(diào)整并記錄),將剪碎組織與 PBS 加入玻璃勻漿器,于冰上充分研磨 。還可對(duì)勻漿液超聲破碎或反復(fù)凍融以進(jìn)一步裂解細(xì)胞,最后以 5000×g 離心 5 - 10 分鐘,取上清檢測(cè) 。

              • 細(xì)胞培養(yǎng)上清:以 1000×g 離心 20 分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片,取上清檢測(cè) 。

            3. 操作流程

              • 準(zhǔn)備工作:從冰箱取出試劑盒,提前 20 分鐘平衡至室溫;濃縮洗滌液若有結(jié)晶,室溫放置輕搖使其溶解后,按 1:20 用蒸餾水或去離子水稀釋 。

              • 加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL,樣本孔加入待測(cè)樣本 50μL,空白孔不加樣 。

              • 溫育與結(jié)合:除空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃溫育 60 分鐘 。

              • 洗滌:棄去孔內(nèi)液體,吸水紙上拍干,每孔加滿 350μL 洗滌液,靜置 1 分鐘,甩去洗滌液,吸水紙拍干,重復(fù)洗板 5 次(也可用洗板機(jī)) 。

              • 顯色:每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15 分鐘 。

              • 終止反應(yīng)與讀數(shù):每孔加入 50μL 終止液,15 分鐘內(nèi)在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔 OD 值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣本濃度 。

            4. 性能指標(biāo)

              • 檢測(cè)范圍:不同試劑盒有所差異,如部分為 25 pg/mL - 800 pg/mL 。

              • 靈敏度:可低至能檢測(cè)出 10 pg/mL 甚至更低濃度 。

              • 特異性:對(duì)人生長(zhǎng)激素釋放肽特異性強(qiáng),基本不與其他可溶性結(jié)構(gòu)類似物發(fā)生交叉反應(yīng) 。

              • 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)通常均小于 15% 。

            5. 注意事項(xiàng)

              • 酶標(biāo)板袋拆封后,及時(shí)將不用板孔放回并加干燥劑保持干燥 。

              • 初次使用試劑盒,先將其平衡至室溫,各試劑管離心數(shù)分鐘,使試劑集中到管底 。

              • TMB A 液需避光保存 。

              • 洗板要充分,否則易導(dǎo)致假陽(yáng)性 。

              • 建議標(biāo)準(zhǔn)品、樣本均做雙份檢測(cè) 。

              • 禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)試劑 。


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