切片染料的選擇與染色技術(shù),與欲觀察的組織和顯微鏡種類均有關(guān)!
閱讀:2158 發(fā)布時(shí)間:2012-6-6
脫水染色:
染色(staining)是將切片浸泡于染色液中,讓組織與染料結(jié)合併產(chǎn)生著色(注2),如此可增強(qiáng)組織在顯微鏡下的對(duì)比效果,方便觀察與拍攝。
染料依化學(xué)性質(zhì)不同可分為堿性染料(basic dye)與酸性染料(acid dye);依來(lái)源可分為天然染料(natural dye)或綜合染料(synthetic dye)。堿性染料帶正電荷,可染上組織細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷(酸性)的部分,如染色體、核仁、木質(zhì)部等;酸性染料則帶負(fù)電荷,可與細(xì)胞內(nèi)帶正電荷之處結(jié)合,如細(xì)胞質(zhì)、纖維素等。
染料的選擇與染色技術(shù),與欲觀察之組織、顯微鏡之種類及光源均有關(guān),如木質(zhì)化的細(xì)胞壁對(duì)番紅(Safranin-O)的親合力較強(qiáng),韌皮部對(duì)速綠(fast green)的親和力較強(qiáng),藉此雙重染色可得到紅綠不同之明顯對(duì)比;若使用偏光顯微鏡(polarizing microscope)則其本身之偏光透鏡即可產(chǎn)生不同色彩對(duì)比之偏光效果,若采用螢光顯微鏡(fluorescent microscope)則需使用螢光劑進(jìn)行染色。
一般觀察木材切片時(shí)可單用番紅或以番紅與速綠進(jìn)行搭配染色即可得到良好之觀察效果。因此在此介紹番紅-速綠雙重染色法。
組織與染料的結(jié)合方式可分為離子型(ionic)、氫鍵型(hydrogen bonding)、共價(jià)鍵型(covalent bonding)等。
離子型與氫鍵型的結(jié)合力較弱,所以染后組織容易脫色,而糗顏色隨pH值與濃度而異。
共價(jià)型染料本身通常可區(qū)分為發(fā)色團(tuán)(chromophore)助色團(tuán)(auxochrome)兩部分,反應(yīng)端的化學(xué)分子通常能與羥基、胺基產(chǎn)生反應(yīng)并結(jié)合。
(注3):fast-green在堿性下呈藍(lán)色,可加濃鹽酸1至數(shù)滴予以調(diào)節(jié)呈綠色。
(注4):二甲苯可和脫水酒精以及封片膠互溶,可作為此兩者之媒介物;如果脫水不*時(shí),加入二甲苯澤溶液會(huì)呈現(xiàn)混濁白色,
因此也可當(dāng)作脫水*之指示劑。
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