介紹幾種常用的轉(zhuǎn)染方法!
閱讀:2064 發(fā)布時(shí)間:2012-10-18
常用的轉(zhuǎn)染方法有如下幾種:
(1)磷酸鈣(calcium phosphate),
(2)DEAE-dextran,
(3)脂小體(liposome),
(4)電穿孔(electroporation),
(5)顯微注射(microinjection),
(6)病毒感染(retrovirus infection),
(7)基因qiang(gene-gun)等。
前兩項(xiàng)方法是以化學(xué)物質(zhì)創(chuàng)造一個(gè)化學(xué)反應(yīng)環(huán)境,讓DNA附著到動(dòng)物細(xì)胞之表面,然后DNA被動(dòng)物細(xì)胞所吞噬。以脂小體為媒介的方式,其主要機(jī)制雖不全然清楚,
但DNA帶負(fù)電之磷酸根會(huì)與脂小體表面之正電荷結(jié)合,脂小體帶正電荷的部分又會(huì)與細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的唾液酸(sialic acid)結(jié)合,藉以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。電穿孔則藉電流方式進(jìn)行。
顯微注射是在顯微鏡的幫助下,直接以微細(xì)針管將物質(zhì)穿刺細(xì)胞打入。病毒感染是利用多種不同的病毒特性,將DNA改造成病毒的一部份,另外病毒本身致癌基因或有害人類健康的基因也加以改造,再藉病毒感染方式送入基因。
基因qiang是一種粒子qiang法(microprojectile bombardment),欲送入的基因可涂裹在細(xì)微的粒子zhidan上,再被推壓如散dan方式射入目標(biāo)細(xì)胞或組織中。除以上所提七種方式外,在植物基因轉(zhuǎn)殖(transgenic plant)上,另可利用農(nóng)桿菌媒介(Agrobacterium-mediated)方式,首先把基因接上載體,再把載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌,藉由農(nóng)桿菌為媒介,把外來(lái)基因?qū)胫参锛?xì)胞。
參考資料:
http://www.bjsgyq.com/