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關(guān)于常見色譜柱的認(rèn)識(shí)誤區(qū)(二)
色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類，液相色譜通常均采用填充柱，色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。
誤區(qū)4、至少需要10個(gè)柱體積才能重新使LC色譜柱達(dá)到平衡
平衡時(shí)間對于梯度色譜來說是非常重要的，因?yàn)樗钦麄€(gè)技術(shù)的限制因素。這有兩種平衡類型：重復(fù)平衡和*平衡。重復(fù)平衡也就意味著在無法實(shí)現(xiàn)*平衡的情況下達(dá)到的平衡。
實(shí)際上，如果在隨后的運(yùn)行中，保留時(shí)間的重復(fù)性是小于0.002min的，然后對于非離子化溶質(zhì)的無緩沖洗脫劑和堿性化合物以常用的甲酸為添加劑的話，重復(fù)平衡在兩個(gè)柱體積的范圍內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)。
誤區(qū)5、相較之純的多孔粒子，表面多孔顆粒會(huì)顯著降低樣品容量
HPLC色譜柱填料對樣品的容量是與其表面積成正比的，這與硅醇基通過單體鍵合形成的化學(xué)鍵合相的量相關(guān)。然而，研究結(jié)果表明：在相同的試驗(yàn)條件下，表面多孔顆粒與多孔粒子對樣品的容量是基本上相同的。
誤區(qū)6、UHPLC填料柱比常見的HPLC填料柱更容易堵塞
隨著柱填料多孔材料粒徑的不斷減小，使得柱的主要硬件設(shè)計(jì)跟著一起發(fā)生變化。對于sub-2μmUHPLC柱的堵塞，是樣品和流動(dòng)相物質(zhì)倒伏在柱入口的結(jié)果。如果你在進(jìn)樣前對樣品進(jìn)行了凈化，如使用固相萃取、過濾或離心等，就可以避開任何污染問題。
誤區(qū)7、保護(hù)柱是沒必要的
使用保護(hù)柱有很多好處。首先，保護(hù)柱可以防止化學(xué)物質(zhì)或顆粒物損壞分析柱。其次，相較之更換一根昂貴的分析柱，更換一根5mm的保護(hù)柱只需要很少的花費(fèi)?，F(xiàn)代的保護(hù)柱具有幾乎無死體積、更換快速，以及適用于UHPLC的高壓等優(yōu)點(diǎn)。
誤區(qū)8、你不可以將HPLC色譜柱反接以便于沖洗掉其中的顆粒物
實(shí)際上HPLC色譜柱的填裝壓力比大使用壓力高很多（通常會(huì)高2倍）。如果裝柱時(shí)使用了恰當(dāng)?shù)膭驖{劑，并且分配一定的時(shí)間使柱床穩(wěn)定，一支填裝良好的色譜柱是*可以雙向使用的。
誤區(qū)9、色譜柱填料粒徑越小、壓力越高，分離效果越好
現(xiàn)代色譜柱的柱特性研究已經(jīng)引發(fā)出一些新方法來評(píng)估一根色譜柱的性能。例如，采用新的表面多孔材料的色譜柱，其柱效與sub-2μmUHPLC柱效一樣好，然而與常規(guī)的LC填料色譜柱比起來，柱壓很低。
誤區(qū)10、柱壓不會(huì)影響色譜分離效果
色譜的很多參數(shù)都是受柱壓影響的，包括部分溶質(zhì)的摩爾體積、停滯體積、柱孔隙度、保留因子、流動(dòng)相密度、介電常數(shù)、固定相結(jié)構(gòu)、pH值和電離常數(shù)等。
當(dāng)色譜柱在約2000psi（13.789MPa）壓力下運(yùn)行時(shí)，即使保留時(shí)間上存在小差異，也并不會(huì)引起我們的注意；特別是如果重復(fù)性較好及定量不受影響的時(shí)候。但是，當(dāng)柱壓接近2000psi（13.789MPa）時(shí)，柱壓的影響可能就相當(dāng)明顯了。