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1 鱟試劑的分類

　　鱟試劑是從棲生于海洋的節(jié)肢動物“鱟”的藍(lán)色血液中提取變形細(xì)胞溶解物，經(jīng)低溫冷凍干燥而成的生物試劑，于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測。

　　1.1 按原料來源分 一種是由美洲鱟血液提取的稱美洲鱟試劑（Limulus Amebocyte Lysate），縮寫為LAL，由美國生產(chǎn);另一種是由東方鱟血液中提取的稱東方鱟鱟試劑（Tachypleus Amebocyte Lysate），縮寫為TAL。TAL與LAL有相同的功效。

　　1.2 按實驗方法分 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者又包括濁度法和顯色基質(zhì)法[1]。則鱟試劑可分為：凝膠法鱟試劑、動態(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑。

　　凝膠法鱟試劑通過與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來定性檢測或半定量內(nèi)毒素的方法。

　　動態(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑則都是定量檢測內(nèi)毒素的。

　　1.3 按使用特點分

　　1.3.1 普通鱟試劑 靈敏度0.5～0.125EU/ml，適用于僅需要檢測內(nèi)毒素*的樣品。

　　1.3.2 高靈敏度鱟試劑 靈敏度0.06～0.015 EU/ml，適用于內(nèi)毒素*較低的樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

　　1.3.3 特異性鱟試劑 靈敏度0.5～0.015EU/ml，適用于成分較為復(fù)雜，會對鱟試劑產(chǎn)生干擾的樣品[2]。

　　1.3.4 定量法鱟試劑 zui低檢測限0.03～0.005 EU/ml，適用于需要對內(nèi)毒素進(jìn)行定量測定的樣品。

　　2 鱟試劑在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中的正確使用

　　內(nèi)毒素檢查法結(jié)果準(zhǔn)確與否與所用鱟試劑的靈敏度相關(guān)性很大[3]，而鱟試劑的靈敏度與它的正確使用又密切相關(guān)。所以，一定要嚴(yán)格執(zhí)行鱟試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范使用鱟試劑。

　　2.1 保證所使用鱟試劑的質(zhì)量 鱟試劑的質(zhì)量主要表現(xiàn)在其靈敏度、自凝時間與成膠狀態(tài)三個方面：靈敏度穩(wěn)定;自凝時間不低于24h[4];具有一定的緩沖能力與合適的pH;反應(yīng)后即形成堅實凝膠，將成膠安瓿翻轉(zhuǎn)180°而不會被破壞。而質(zhì)量稍差的鱟試劑存放一定時間后（如半年）其靈敏度可能發(fā)生變化，而靈敏度的改變會使測定結(jié)果所反映的供試品中內(nèi)毒素的允許限值發(fā)生變化[5]。因此，需選擇具有國家頒發(fā)的批準(zhǔn)文號,質(zhì)量穩(wěn)定的鱟試劑。

　　2.2 對鱟試劑靈敏度進(jìn)行監(jiān)測性復(fù)核 由于不同廠家鱟試劑質(zhì)量不盡相同，即便是相同廠家不同批號的鱟試劑也有差異,這便導(dǎo)致鱟試劑靈敏度復(fù)核值與標(biāo)示值不盡一致，因此鱟試劑的復(fù)核值對檢測結(jié)果有顯著影響[6]。每使用新批號鱟試劑時應(yīng)復(fù)核其靈敏度;對留樣鱟試劑自生產(chǎn)之日起，每6個月進(jìn)行一次靈敏度檢測，其靈敏度在有效期內(nèi)應(yīng)符合規(guī)定。有研究表明，鱟試劑的靈敏度在符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及適當(dāng)?shù)馁A存條件下,3年內(nèi)其靈敏度變化不大，是穩(wěn)定的。建議可適當(dāng)延長其有效期[7,8]。因此，對鱟試劑靈敏度進(jìn)行監(jiān)測性復(fù)核有利于確保實驗的準(zhǔn)確性，同時可以zui大程度地使用鱟試劑。

　　2.3 使用過程正確操作 選擇合適的操作方法與順序，在鱟試劑的使用過程中尤為重要。在操作過程中要注意以下幾點：（1）實驗室要求潔凈、無塵埃流通;檢驗人員同時注意衛(wèi)生的保持。在整個使用操作過程中應(yīng)防止微生物的污染，例如空氣的流動，人員的口沫、汗液污染等。（2）鱟試劑開啟、溶解和配制時應(yīng)盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中，避免鱟試劑外損。（3）鱟試劑中含有多種蛋白質(zhì)，用力振搖會產(chǎn)生氣泡，一旦起泡難以消除，而影響檢測的準(zhǔn)確性，所以在整個操作過程中都要輕力以避免因過分震動而引起的誤差。（4）量取和加樣反應(yīng)物時，一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。（5）生成凝膠的zui適pH值為6～8，對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液（5%,10%）等注射液，不需考慮供試液的pH值，而檢查其他制劑時，尤其是一些本身緩沖能力較強(qiáng)或偏酸、堿的供試品，應(yīng)考慮供試品的pH值[5]。（6）使用時要嚴(yán)格控制溫度和時間。當(dāng)鱟試劑一加入內(nèi)毒素及樣品混合液中時反應(yīng)已開始，并在一定的溫度范圍內(nèi)，反應(yīng)溫度越高，反應(yīng)速率越大;保溫時間的增長，也會提高鱟試劑的靈敏度，增加假陽性的發(fā)生[9]，導(dǎo)致較大誤差。因此，要注意控制溫度的變化和保溫時間。（7）保持實驗器具的潔凈。每次檢驗完畢，應(yīng)及時將玻璃器具充分清洗后于250℃干熱滅菌處理，待烤箱溫度升至設(shè)定的溫度后開始計時，干烤至少1h[10]。也可用其他經(jīng)確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h，用無熱原水沖洗，70℃干燥備用。

　　2.4 鱟試劑的貯存 雖然凍干的鱟試劑在常溫條件下是相對穩(wěn)定的，但還是應(yīng)存放在2℃～8℃下，避免長時間放置在高于25℃的溫度條件下導(dǎo)致因貯藏不當(dāng)、質(zhì)量下降而引起的檢驗誤差。

　　3 建議

　　3.1 一般中草藥注射液由于成分復(fù)雜，以及含糖注射液中常含有β-葡聚糖[11]，使其干擾因素較多。而使用特異性鱟試劑，可利用其能夠屏蔽β-葡聚糖引起的鱟試劑凝聚反應(yīng)，僅與內(nèi)毒素反應(yīng)的原理，以消除干擾[12～14]，從而減少或消除假陽性反應(yīng)[15]。

　　3.2 當(dāng)夏天室溫較高時，控制鱟試劑使用過程中溫度的變化，可通過在冰水浴中進(jìn)行加樣以取得較好效果;同時，實驗操作從鱟試劑的復(fù)溶到放入恒溫儀應(yīng)盡量在1.5h內(nèi)完成。

　　3.3 雖然目前的鱟試劑相對穩(wěn)定很多，但還是應(yīng)存放于2℃～8℃的條件下，并保持溫度的穩(wěn)定，如冰箱發(fā)生故障，無法保持溫度時，就應(yīng)及時更換貯存設(shè)備。

　　3.4 對于已復(fù)溶的鱟試劑在間歇使用過程中放置在冰冷的表面上或于2℃～8℃的冰箱內(nèi)存放24h以內(nèi);亦或在復(fù)溶并凍結(jié)后將其存放在-20℃以下，可存放28天，但只能凍融一次。

【參考文獻(xiàn)】
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　　2 施震，尹銀嘉，李華. 特異性鱟試劑和非特異性鱟試劑對艾迪注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的比較. 中國生化藥物雜志，2003，24（3）：137-138.

　　3 梁蘋，蔡紅. 鱟試劑靈敏度對細(xì)菌內(nèi)毒素*的影響. 華西藥學(xué)雜志，1999，14（3）：204-204.

　　4 衛(wèi)生部. 部標(biāo)準(zhǔn)《鱟試劑》 修訂稿. WS1-364（B-123）-91.

　　5 張紅霞, 陳慧, 馬金剛. 影響鱟試劑靈敏度測定結(jié)果因素的分析. 中國藥師，2007，10（8）：825-826.

　　6 程義琳，吳蕙玲. 鱟試劑靈敏度對檢測結(jié)果的影響. 中國藥師，2005，8（4）：344-345.

　　7 陳引秀. 鱟試劑靈敏度穩(wěn)定性的考察. 海峽藥學(xué)，2004，16（3）：83-84.

　　8 金華. 鱟試劑靈敏度穩(wěn)定性觀察. 醫(yī)學(xué)理論與實踐，2004，17（1）：84-84.

　　9 黃冬，房判石.鱟試劑法檢測細(xì)菌內(nèi)毒素假陽性原因淺析. 首都醫(yī)藥，2002，9（5）：53-54.

　　10 中國藥品生物制品檢定所. 中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范. 北京：中國醫(yī)藥科技.

　　11 葉良君，張強(qiáng)，張濤，等.β-葡聚糖對含糖大輸液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的影響.中國藥業(yè)，2008，17（19）：24-25.

　　12 黃東燕. 特異性鱟試劑檢測當(dāng)歸注射液細(xì)菌內(nèi)毒素. 中成藥，2000，22（8）：541-543.

　　13 張貴寶，徐紫娟，白文東. 鱟試劑用于20%甘露醇注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢測. 工企醫(yī)刊，2007，20（6）：18-20.

　　14 尹銀嘉，商小曼. 特異性鱟試劑檢測人參多糖注射液中的細(xì)菌內(nèi)毒素. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22（11）：677-679.

　　15 唐坤.棄G因子鱟試劑檢測在大輸液中應(yīng)用. 華夏醫(yī)學(xué)，2000，13（2）：219-221.