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士鋒生物凝集反應（agglutination reaction）實驗
點擊次數(shù)：680 發(fā)布時間：2013-11-27
當顆粒性抗原與其相應抗血清混合時，在有一定濃度的電解質環(huán)境中，抗原凝集成大小不等的凝集塊，叫做凝集反應。
凝集反應廣泛地應用于疾病的診斷和各種抗原性質的分析。即可用已知免疫血清來檢查未知抗原，亦可用已知抗原檢測特異性抗體。
一．直接凝集反應
顆?？乖c抗體直接結合出現(xiàn)凝集現(xiàn)象叫直接凝集反應。
（一）玻片凝集反應
材料：
1．診斷血清：1：10稀釋的傷寒桿菌診斷血清
2．菌種：傷寒桿菌、痢疾桿菌24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物
3．生理鹽水、載玻片、毛細吸管
方法：
1．取清潔玻片一張，用蠟筆劃為三格，并注明號碼。無菌操作下，用接種環(huán)于1、2格內加1：10稀釋傷寒桿菌診斷血清1-2滴，第三格加1-2滴生理鹽水。
2．無菌操作下，用接種環(huán)取傷寒桿菌培養(yǎng)物少許，混于第三格中，再混于*格中（不能先混*格再混第三格，因為這樣將使診斷血清混入鹽水而影響對照結果），將細菌與鹽水或血清混合均勻使呈乳狀液。此時取菌量不可過多，使懸液呈輕度乳濁即可。
3．同法取枯草桿菌培養(yǎng)物少許，于第二格內混勻。
4．輕輕搖動玻片，經1-2分鐘后肉眼觀察，出現(xiàn)乳白色凝集塊者，即為陽性反應；仍為平等的乳濁液者，即為陰性反應。如結果不夠清晰，可將玻片放于低倍顯微鏡下觀察。
（二）試管凝集反應
為一種定量試驗，用已知抗原檢查血清中有無特異抗體，并測定其相對含量。
材料：
1．診斷血清1：10稀釋傷寒桿菌“H”血清，1：10稀釋傷寒桿菌“O”血清。
2．菌液：傷寒桿菌“H”菌液，傷寒桿菌“O” 菌液。
3．生理鹽水，小試管，吸管。
方法：
1．取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上，每排7只依次用蠟筆注明號碼，于每管中分別加入0.5毫升生理鹽水。
2．在第1排1管中加入1：10稀釋傷寒H血清0.5毫升，于管內連續(xù)吹吸3次，使血清與鹽水充分混合，而后吸出0.5毫升注入第2管，同樣予以混勻后吸出0.5毫升注入第3管。依次類推，稀釋到第6管，自第6管吸出0.5毫升棄去。此時，自第1管至第6管的血清稀釋倍數(shù)為1：20，1：40，1：80，1：160，1：320，1：640。第7管不加血清作為對照。
3．同法用吸管吸取1：10稀釋傷寒桿菌O血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀釋。
4．用移液管吸取傷寒桿菌H菌液，加收第1排各管中每管0.5毫升（由鹽水對照管開始，依次由后向前加入）此時血清稀釋倍數(shù)又增加了一倍。
5．同法于第2排各管中加入傷寒O菌液0.5毫升。
6．將各管振蕩混勻，放37℃水浴箱中2—4小時或37℃孵育箱中次日取出觀察
結果。
觀察結果：
1．觀察切勿搖動試管，以免凝集塊分散。
2．先看對照管，此管應無凝集現(xiàn)象，管內液體仍成混濁狀態(tài)。但如放置時間較長，細菌堆于管底成小圓點狀，為陰性反應。
3．試驗管應自第1管看起，如有凝集時則于管底有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物，上清則澄清透明或不同程度混濁。凝集的強弱可用“+”號表示如下：
“++++”凝集很強，管內液體*澄清，凝集塊*沉于管底；
“+++”凝集強，管內液體不*澄清稍有輕度混濁，凝集塊沉于管底；
“++”凝集中等強度，液體半澄清，凝集塊沉于管底；
“+”凝集弱，管內液體混濁，少量凝集塊沉于管底；
“－”不凝集，管內液體和對照管同樣混濁，無凝集塊。
4．輕輕振蕩各管，觀察凝集塊的狀態(tài)，對照管的細菌在振蕩時呈煙霧狀上升，隨即消散，細菌分散仍呈混濁狀態(tài)。“H”菌液的凝集塊疏松呈棉狀，大片沉于管底輕搖即升起，并極易破碎。“O”菌液凝集呈緊密顆粒狀，沉于管底堅實致密，輕輕振搖不易升起，凝集顆粒較小不易搖碎。
5．記錄觀察的結果并制定凝集效價。通常以能產生明顯凝集（++）的血清大稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價。如血清的zui低稀釋度（即第1管1：40）仍無凝集應報告為低于1：40。如血清的zui高稀釋度（即第6管1：1280）仍顯*凝集現(xiàn)象。，應報該血清效價高于1：1280。