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常用免疫組織化學(xué)染色方法
點(diǎn)擊次數(shù)：764 發(fā)布時(shí)間：2013-12-19
(一)、ABC法：(注，下面各種方法，均為手工操作，如沒(méi)特別說(shuō)明，均在室溫下進(jìn)行)
1.切片經(jīng)二甲苯Ⅰ 5分鐘。
2.切片經(jīng)二甲苯Ⅱ 5分鐘。
3. *Ⅰ 30秒。
4. *Ⅱ 30秒。
5. 95%酒精Ⅰ 30秒。
6. 95%酒精Ⅱ 30秒。
7. 90%酒精 30秒。
8.80%酒精 30秒。
9. 70%酒精 30秒。
10.自來(lái)水洗。(后面的切片脫蠟至水一般都是1-10)
11.0.3%H2O2甲醇處理切片10-20分鐘。
12.水洗。
13.抗原修復(fù)。
14.PBS洗3次，1分鐘/次。
15.加入血清孵育20分鐘。
16.摔干血清，加入一抗60分鐘。
17.PBS洗3次，2分鐘/次。
18.加入二抗孵育30分鐘。
19.PBS洗3次，2分鐘/次。
20.加入ABC復(fù)合物，孵育30分鐘。
21. PBS洗3次，2分鐘/次。
22.DAB-H2O2孵育切片5-10分鐘。
23.PBS洗，水洗。
24.Harris蘇木素染核5-10分鐘。
25.水洗，分化，藍(lán)化，脫水，透明并封固。
(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln)
1.切片脫蠟至水。
2.0.3%H2O2甲醇處理切片10-20分鐘。
3.水洗。
4.抗原修復(fù)。
5.PBS洗3次，1分鐘/次。
6.加入血清孵育10分鐘。
7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分鐘。
8.PBS洗3次，每次2分鐘。加入二抗，孵育20分鐘。
9.PBS洗3次，每次2分鐘。
10.加入SP復(fù)合物孵育20-30分鐘。
11.PBS洗3次，每次2分鐘。
12.DAB-H2O2孵育5-10分鐘。
13.PBS洗，水洗。
14.Harris蘇木素染核5-10分鐘。
15.水洗，分化 ，藍(lán)化，脫水，透明并封固。