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士鋒生物實驗中如何進行血清總補體溶血活性（CH50）測定
點擊次數(shù)：939 發(fā)布時間：2014-1-3
綿羊紅細胞（SRBC），與相應抗體（溶血素）結合后，可激活待檢血清中的補體而導致SRBC溶血。其溶血程度與血清中補體的含量和功能有關。由于補體含量與溶血程度之間呈正相關，但不是直線關系，而呈S曲線關系，故通常取反應曲線中間部位即50％溶血（CH50）為判定終點。由于抗原抗體復合物激活的是補體的經典途徑，C1～9任何一種成分缺陷都可使CH50降低，所以此實驗反映了總補體的活性。
【材料】磷酸緩沖鹽水(pH7.4 PBS)、2%綿羊紅細胞、溶血素（2單位）、待檢血清、小試管、吸管、37℃水浴箱等。
【方法】
1、標準曲線的制備
(1)2%血紅素溶液配制: 吸取5m1 2%綿羊紅細胞懸液加入離心管中，2000rpm離心5分鐘，去除上清，加蒸餾水2.5m1，待羊紅細胞溶解后，再加1.7%NaCl溶液2.5m1，混勻，即為2%血紅素溶液。
(2)取小試管11支，按表5-1分別加入各成分。
(3)混勻后2000rpm離心5分鐘，取上清用分光光度計(波長540nm)測光密度值。
(4)以光密度值為縱坐標，溶血%為橫坐標，繪出標準曲線。
2、待檢血清測定
（1） 取病人血清0.1ml，加PBS 3.9ml，使成1:40稀釋，混勻后分裝4個小試管，每管1ml。
（2） 加2單位溶血素，每管lml。
（3） 加2%綿羊紅細胞，每管lml。
（4） 37℃水浴30分鐘。
（5） 2000rpm離心5分鐘
（6） 取上清液測光密度值（540nm波長）。
表5-1 CH50測定的標準曲線制備
【結果】
按下法計算每ml待檢血清中的補體含量 (計算4管的平均值)。
例: 病人血清稀釋度1:40，測得光密度值為0.48 (平均值)，自標準曲線查出溶血%為60，則: 40:X = 50:60
血清總補體溶血活性（CH50）測定
此結果主要反映通過經典途徑活化的總補體的活性。