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士鋒生物植物同工酶實驗介紹
點擊次數(shù)：600 發(fā)布時間：2014-3-3
一、實驗原理
同工酶（isozymes）是指作用于底物相似或*相同的酶的不同分子形式，即催化同一種反應(yīng)而結(jié)構(gòu)不同的一族酶。它們是受遺傳體系決定的酶的不同分子形式。利用凝膠電泳技術(shù)可以將它們分開，用專一的作用底物和特殊染料，把需要分析的酶染色，在膠柱上呈現(xiàn)同工酶譜。
二、實驗?zāi)康?nbsp;
1.通過實驗掌握植物同工酶實驗技術(shù)，了解植物同工酶分析在遺傳學(xué)研究中的意義。
2.著重掌握過氧化物酶的提取，電泳與染色技術(shù)和分析方法。
三、實驗材料
以下內(nèi)容任選一組或二組即可
1.二種不同品種蠶豆。
2.蠶豆的新種子和儲藏2—3年陳種子。
3.蠶豆與豌豆。
4.甘藍(lán)和甘藍(lán)型油菜的幼苗嫩葉。
5.不同品種的柑桔嫩葉。
四、實驗器具和藥品
1.用具：電泳儀，電泳槽，注射筒及針頭，微量注射器，裝凝膠用玻璃管（內(nèi)徑為5毫米、長度為90毫米）、離心機(jī)。
2.藥品：三羥甲基氨基甲烷（Tris），四甲基乙二胺（TEMED），丙烯酰胺（Acr），甲叉雙丙烯酰胺（Bir），甘氨酸，過硫酸銨，蔗糖，溴酚藍(lán)，聯(lián)苯胺，過氧化氫。
五、實驗說明
同工酶的不同分子形式，可以出現(xiàn)在同一生物的不同發(fā)育時期，所以取不同期的材料，酶帶的情況就不一樣。這是同工酶技術(shù)適用于發(fā)育研究的方便之處。另一方面，利用同工酶技術(shù)進(jìn)行遺傳學(xué)分析與群體遺傳學(xué)研究時，則特別要求取材的一致性。否則，它們之間的差異可能不是遺傳而是由發(fā)育造成的。例如要比較兩個品種蠶豆的遺傳差別，可用它們的發(fā)芽種子進(jìn)行比較。但這時至少應(yīng)該檢查是否是同年的種子、是否在發(fā)芽前都曬過種、是否是同時浸種，是合是恒溫發(fā)芽，以及是否是取同樣部位和同樣分量等。
六、實驗步驟
（一）不同品種或種間的植物，取發(fā)育時期相同，組織相同的樣品，制備酶粗提液。一般取樣0.5克，或在恒溫條件下發(fā)芽的幼苗3—5個，置于研缽中，加入0.1毫升—0.5毫升水研磨勻漿、后將樣品移至小離心管中離心（3500rpm）15分鐘，取上清液，混入等體積的50％的蔗糖溶液，電泳前可在冰箱中保存。
（二）聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)的配制
A液：1mol/LHCl48.0毫升，Tris36.4克：TEMED0.23
毫升加水至100毫升，pH8.3。
B液：丙烯酰胺28.0克；甲叉雙丙烯酰胺0.735克加水至100毫升。
C液：過硫酸銨（用前配制）1.4％。
配膠：A∶B∶C∶H2O=1∶2∶0.4∶4.6
配膠后立即灌好裝膠的玻璃管