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士鋒生物植物種子生命力的快速測定
點擊次數(shù)：620 發(fā)布時間：2014-3-7
Ⅰ.TTC法
一、原理
TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化態(tài)是無色的，可被氫還原成不溶性的紅色三苯甲月替（TTF）。應用TTC的水溶液浸泡種子，使之滲入種胚的細胞內(nèi)，如果種胚具有生命力，其中的脫氫酶就可以將TTC作為受氫體使之還原成為三苯甲月替而呈紅色，如果種胚死亡便不能染色，種胚生命力衰退或部分喪失生活力則染色較淺或局部被染色，因此，可以根據(jù)種胚染色的部位或染色的深淺程度來鑒定種子的生命力。
二、材料、儀器設備及試劑
（一）材料：水稻、小麥、玉米、棉花、油菜等待測種子。
（二）儀器設備：1. 小燒杯；2. 刀片；3. 鑷子；4. 溫箱；
（三）試劑：0.12％～0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，應隨用隨配）。
三、實驗步驟
1. 將種子用溫水（約30℃）浸泡2～6h，使種子充分吸脹。
2. 隨機取種子100粒，水稻種子要去殼，豆類種子要去皮，然后沿種胚中央準確切開，取其一半備用。
3. 將準備好的種子浸于TTC試劑中，于恒溫箱（30～35℃）中保溫30min。
4. 染色結(jié)束后要立即進行鑒定，因放久會褪色。倒出TTC溶液，再用清水將種子沖洗1～2次，觀察種胚被染色的情況，凡種胚全部或大部分被染成紅色的即為具有生命力的種子。種胚不被染色的為死種子，如果種胚中非關鍵性部位（如子葉的一部分）被染色，而胚根或胚芽的不染色都屬于不能正常發(fā)芽的種子
Ⅱ.染料染色法
原理
有生命力種子胚細胞的原生質(zhì)膜具有半透性，有選擇吸收外界物質(zhì)的能力，一般染料不能進入細胞內(nèi)，胚部不染色。而喪失生命力的種子，其胚部細胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收能力，染料可自由進入細胞內(nèi)使胚部染色。所以可根據(jù)種子胚部是否被染色來判斷種子的生命力。
二、材料、設備及試劑
（一）材料：水稻、玉米、大豆、棉花、小麥及一些樹木種子。
（二）設備：1. 小燒杯；2. 刀片；3. 鑷子；（三）試劑：0.02％～0.2％靛紅溶液或5％紅墨水（酸性大紅G）。
三、實驗步驟同TTC法。
Ⅲ.熒光法
一、原理
植物種子中常含有一些能夠在紫外線照射下產(chǎn)生熒光的物質(zhì)如某些黃酮類、香豆素類、酚類物質(zhì)等，在種子衰老過程中，這些熒光物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和成分往往發(fā)生變化，因而熒光的顏色也相應地有所改變；而且這些種子在衰老死亡時，內(nèi)含熒光物質(zhì)雖然沒有改變，但由于生命力衰退或已經(jīng)死亡的細胞原生質(zhì)之透性增加，當浸泡種子時，細胞內(nèi)的熒光物質(zhì)很容易外滲。因此，可以根據(jù)前一種情況直接觀察種胚熒光的方法來鑒定種子的生命力，或根據(jù)后一種情況通過觀察熒光物質(zhì)滲出的多少來鑒定種子的生命力。
二、材料及設備
1. 待測的植物種子；2. 紫外光燈；3. 白紙（不產(chǎn)生熒光的）；4. 刀子；5. 鑷子；6. 培養(yǎng)皿；7. 燒杯。
三、實驗步驟
（1）直接觀察法 這種方法適用于禾谷類、松柏類及某些薔薇科果樹的種子生命力的鑒定，但種間的差異較大。用刀片沿種子的中心線將種子切為兩半，使其切面向上放在無熒光的白紙上，置于紫外光燈下照射并進行觀察、記載。有生命力的種子在紫外光的照射下將產(chǎn)生明亮的藍色、藍紫色或藍綠色的熒光；喪失生命力的死種子在紫外光照射下多呈黃色、褐色以至暗淡無光，并帶有多種斑點。隨機選取20粒待測種子按上述方法進行觀察并記載有生命力及喪失生命力的種子的數(shù)目，然后計算有生命力種子所占百分數(shù)。與此同時也作一平行的常規(guī)發(fā)芽試驗，計算其發(fā)芽率作為對照。
（2）紙上熒光 隨機選取50粒完整無損的種子置燒杯內(nèi)加蒸餾水浸泡10～15min令種子吸脹，然后將種子瀝干，再按0.5cm的距離擺放在濕濾紙上（濾紙上水分不宜過多，防止熒光物質(zhì)流散）以培養(yǎng)皿覆蓋靜置數(shù)h后將濾紙（或連同上面擺放的種子）風干（或用電吹風吹干）。置紫外光燈下照射，可以看到擺過死種子的周圍有一圈明亮的熒光團，而具有生命力的種子周圍則無此現(xiàn)象。根據(jù)濾紙上顯現(xiàn)的熒光團的數(shù)目就可以測出喪失生命力的種子的數(shù)量，并由此計算出有生命力種子所占的百分率。此外，可與此同時作一平行的常規(guī)種子萌發(fā)試驗計算其發(fā)芽率作為對照。這個方法應用于白菜、蘿卜等十字花科植物種子生命力的鑒定上效果很好。但對于一些在衰老、死亡后減弱或失去熒光的種子便不適用此法，因此，對它們只宜采用直接察法。