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用支持物培養(yǎng)法培養(yǎng)貼壁細胞
點擊次數(shù)：857 發(fā)布時間：2014-8-21
基本原理
通過在支持物（如蓋玻片）上培養(yǎng)貼壁細胞，可以應(yīng)用抗體檢測細胞表面抗原的表達或進行酶細胞化學以及免疫細胞化學檢測。該方法的優(yōu)點是細胞貼壁牢固，能夠維持細胞生長時的狀態(tài)。
試劑和設(shè)備
細胞懸浮液；
6孔平底組織培養(yǎng)板，或φ60 mm培養(yǎng)皿；
18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片；
含血清培養(yǎng)基（通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素）；
超凈工作臺；
CO2孵箱；
蓋片鑷；
操作步驟
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。