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動(dòng)脈粥樣硬化患者VSMC的提取
點(diǎn)擊次數(shù)：605 發(fā)布時(shí)間：2014-10-29
實(shí)驗(yàn)材料：
眼科剪刀1把 眼科鑷子2把 1×PBS約200ml M199培養(yǎng)液 離心機(jī) 5ml小皿 10ml大皿
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、在超凈臺(tái)內(nèi)用10ml的離心管分裝5ml的1×PBS（已高壓滅菌）。
2、手術(shù)臺(tái)上取患者發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化改變的病變動(dòng)脈，分放入準(zhǔn)備好的PBS中，拿回實(shí)驗(yàn)室在超凈臺(tái)中，無(wú)菌條件下剝?nèi)ネ饽?，用手術(shù)刀片刮去內(nèi)膜，留下中膜并將其剪成1×1mm大小組織塊。
3、消化法：PBS清洗組織塊后并將其轉(zhuǎn)移入10ml的離心管，加入0.125％胰酶消化37℃30分鐘，室溫吹打100分鐘或者振蕩器振蕩100分鐘，待組織塊變小且消化液變粘時(shí)，收集消化液配平以1500轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘后，收集細(xì)胞種植于預(yù)先加入M199培養(yǎng)液的5ml小皿中放入37度5％CO2的培養(yǎng)箱中。
4、貼塊法：PBS清洗組織塊后移入已準(zhǔn)備好的10ml大皿中，塊間距為0.5cm，放入37度5％CO2的培養(yǎng)箱中，3小時(shí)后，待組織塊貼壁后，再加入2ml培養(yǎng)液后放回37度5％CO2的培養(yǎng)箱中。
注意：zui后加入2ml培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)使其順無(wú)組織塊的皿邊緣緩慢流下，勿使組織塊吹下。
5、隨后每3天予以半量換液。
6、一周后可見(jiàn)組織塊周圍有細(xì)胞爬出，大約3周后80％融合。