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細(xì)胞培養(yǎng)之無菌技術(shù)注意事項匯總
點擊次數(shù)：732 發(fā)布時間：2015-1-21
簡介
細(xì)胞培養(yǎng)的成功很大程度上取決于保護細(xì)胞免受細(xì)菌、真菌和病毒等微生物的污染。非無菌物品、培養(yǎng)基和試劑、帶有微生物的空氣顆粒、不干凈的培養(yǎng)箱和污染的工作臺面均是導(dǎo)致微生物污染的來源。
無菌技術(shù)的作用是在環(huán)境微生物與無菌的細(xì)胞培養(yǎng)物之間形成一道屏障，它通過一套操作流程來降低培養(yǎng)物被上述污染源污染的可能。無菌技術(shù)的組成要素包括：無菌工作區(qū)域、良好的個人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。
無菌工作區(qū)域
zui為簡單、經(jīng)濟的減少空氣顆粒和氣體揮發(fā) (例如：灰塵、芽孢、皮屑、噴嚏) 污染的方
法就是采用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥。
細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥應(yīng)正確設(shè)置，放置于專門用于細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)域，同時要避免來自門、
窗及其他設(shè)備的氣流，不能有直接的來往通道。
工作臺面應(yīng)保持整潔，只放置特定實驗所需的物品；不能用作儲存區(qū)域。
使用前后均應(yīng)*消毒工作臺面，周圍區(qū)域和設(shè)備應(yīng)定期清潔。
常規(guī)清潔時，工作前和工作過程中，特別是發(fā)生潑濺后，應(yīng)使用 70% 乙醇擦拭工作臺面。
使用完畢后，可用紫外燈對細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)空氣和暴露在外的工作臺面進行消毒。
在細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)不需要也不建議使用煤氣燈火焰。
細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥應(yīng)始終保持運轉(zhuǎn)，長時間不使用時方可關(guān)閉。
良好的個人衛(wèi)生
操作細(xì)胞培養(yǎng)物前后應(yīng)洗手。穿戴個人防護設(shè)備不僅可保護您免受危險品污染，還可降低皮屑以及衣服上污物和灰塵污染培養(yǎng)物的可能。
無菌試劑和培養(yǎng)基
商品化試劑和培養(yǎng)基經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制以確保其無菌性，但是在操作過程中這些產(chǎn)品可能被污染。應(yīng)遵循以下無菌操作原則以免污染。必須采用適當(dāng)?shù)臏缇椒?(例如：高壓蒸汽、無菌過濾) 對實驗室中配制的所有試劑、培養(yǎng)基和溶液進行滅菌。
無菌操作
必須用 70% 乙醇擦拭雙手和工作區(qū)域。
在容器、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥之前，必須用 70% 乙醇擦拭其外部。
不要從試劑瓶或培養(yǎng)瓶中直接傾倒培養(yǎng)基和試劑。
使用無菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液體；每支吸管只能使用一次，以免交叉污染。使用時方可打開無菌吸管的包裝。吸管應(yīng)始終位于工作區(qū)域內(nèi)。
試劑瓶和培養(yǎng)瓶用后必須蓋上，用膠帶將多孔板密封起來或者將其放入重復(fù)密封袋中，以免微生物和空氣污染物進入，污染培養(yǎng)物。
無菌培養(yǎng)瓶、試劑瓶、培養(yǎng)皿等物品使用時方可揭開蓋子，不得將其開放暴露于環(huán)境中。操作完成后盡快蓋上蓋子。
取下蓋子時應(yīng)將蓋子開口朝下放在工作臺面上。
必須使用無菌玻璃器皿和其他設(shè)備。
進行無菌操作時不要說話、唱歌或者吹口哨。
盡快完成實驗，以盡量避免污染。