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公司動態(tài)
PCR基因擴增
點擊次數(shù)：668 發(fā)布時間：2016-1-4
一、原理
多聚酶鏈式反應（polymerase chain reaction , PCR）類似于DNA 的天然復制過程：經(jīng)過變性、退火、延伸多次循環(huán)（圖1 ) , DNA 擴增倍數(shù)可達2 n 倍。即
Y = ( 1 + X ) n
式中，Y 為DNA 擴增倍數(shù)；X 為擴增效率；n 為循環(huán)次數(shù)
二、材料
（1）模板DNA；PCR 引物；Taq DNA 聚合酶；dNTP ； PCR 緩沖液［20 mmol / L Tris -Hcl 緩沖液（pH 5.3 ) , 1.5 mmol / L MgCl2 , 25 mmol / L Kcl , 100 μg / mL 滅菌明膠或無核酸酶的牛血清白蛋白，0.05 % Tween 20 〕；石蠟油。
（2）乙肝病毒基因的PCR 檢測試劑盒。
（3） PCR 擴增儀。
PCR基因擴增
圖1 PCR 基本原理示意圖
三、方案
1 、經(jīng)典的PCR 擴增方案
經(jīng)典的PCR 擴增方案為：
反應總體積 100μL
模板DNA 105 -106 個分子
PCR 引物 20 pmol / L
Taq DNA 聚合酶 2U
dNTP 50 μmol / L
PCR 緩沖液
20 mmol /L Tris-HCI 緩沖液（pH8.3 )
1.5 mmol /L MgC12
25 mmol /L KCl
100μL 滅菌明膠或無核酸酶的牛血清白蛋白
等體積石臘油覆蓋。
2、乙肝病毒基因的PCR 檢測
1 ） 標本處理