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植物基因轉(zhuǎn)化常用方法
點(diǎn)擊次數(shù)：612 發(fā)布時(shí)間：2016-3-2
一. 植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法
植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)可分為兩大類：一類是直接基因轉(zhuǎn)移技術(shù)，包括基因槍法、原生質(zhì)體法、脂質(zhì)體法、花粉管通道法、電激轉(zhuǎn)化法、PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化方法等，其中基因槍轉(zhuǎn)化法是代表。另一類是生物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法，主要有農(nóng)桿菌介導(dǎo)和病毒介導(dǎo)兩種轉(zhuǎn)化方法，其中農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法操作簡(jiǎn)便、成本低、轉(zhuǎn)化率高，廣泛應(yīng)用于雙子葉植物的遺傳轉(zhuǎn)化。
二.農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化方法
（一）農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒與T-DNA的整合機(jī)制
幾乎所有雙子葉植物都容易受到土壤農(nóng)桿菌感染，而產(chǎn)生根瘤。它是一種革蘭氏陰性土壤桿菌（A. tumefaciens）。其致瘤特性是由Ti（tumor－inducing）質(zhì)粒介導(dǎo)的。農(nóng)桿根瘤菌之所以會(huì)感染植物根部是因?yàn)橹参锔繐p傷部位分泌出酚類物質(zhì)乙酰丁香酮和羥基乙酰丁香酮，這些酚類物質(zhì)可以誘導(dǎo)Vir（Virulence region)基因的啟動(dòng)表達(dá)，Vir基因的產(chǎn)物將Ti質(zhì)粒上的一段T－DNA單鏈切下，而位于根瘤染色體上的操縱子基因產(chǎn)物則與單鏈T－DNA結(jié)合，形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)化植物根部細(xì)胞。T－DNA上有三套基因，其中兩套基因分別控制合成植物生長(zhǎng)素與分裂素，促使植物創(chuàng)傷組織無(wú)限制地生長(zhǎng)與分裂，形成冠癭瘤。第三套基因合成冠癭堿，冠癭堿有四種類型：章魚堿（octopine）、胭脂堿（nopaline）、農(nóng)桿堿（agropine）、琥珀堿（succinamopine），使農(nóng)桿菌生長(zhǎng)必需的物質(zhì)。
1. Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)
在發(fā)現(xiàn)根瘤農(nóng)桿菌誘發(fā)冠癭瘤的本質(zhì)是Ti質(zhì)粒后，Ti質(zhì)粒便成為冠癭瘤形成基因鑒定與分析的主要研究對(duì)象。
Ti質(zhì)粒大約在160～240kB之間。其中T-DNA大約在15kb-30kb。Vir基因區(qū)在36kb左右。除此之外，Ti質(zhì)粒上還存在Con區(qū)（region encoding conjugation)和Ori區(qū)（origin of replication)。
植物基因轉(zhuǎn)化常用方法