會(huì)員.png)
QQ交談
您所在位置：請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://apwanrong.com/st236594/
RAPD技術(shù)在昆蟲學(xué)中的應(yīng)用
點(diǎn)擊次數(shù)：750 發(fā)布時(shí)間：2016-3-16
RAPD標(biāo)記的一個(gè)明顯的特點(diǎn)是RAPD引物無特異性，可以用未知序列的基因組DNA作為模板，通過PCR擴(kuò)增獲得一組不連續(xù)的DNA片段，且RAPD所需引物較短，10個(gè)左右的寡核苷酸即可。其次，一套引物可用于不同生物，建立一套標(biāo)準(zhǔn)引物，便可用于生物種內(nèi)多態(tài)性鑒定。由于DNA擴(kuò)增儀的使用，使操作自動(dòng)化程度高，分析量大，免去了RFLP中制備探針、同位素標(biāo)記、Southern印跡法及分子雜交等步驟，從而構(gòu)成了RAPD分析速度快，所需DNA樣品少等優(yōu)點(diǎn)：尤其使PAPD標(biāo)記可以在對(duì)生物種沒有任何分子生物學(xué)研究基礎(chǔ)的情況下，對(duì)物種進(jìn)行基因組DNA指紋圖譜的構(gòu)建。
一、RAPD技術(shù)在昆蟲分類學(xué)中的應(yīng)用
傳統(tǒng)的昆蟲分類方法都是以外部形態(tài)為依據(jù)，在大的分類單位內(nèi)能清楚地確定一個(gè)物種的分類地位，但對(duì)于某些物種，在確定了它的屬、族或種等分類地位時(shí)，僅憑借外部形態(tài)往往是難以確定的。由于物種的進(jìn)化本質(zhì)上是基因組的進(jìn)化，因而分子分類學(xué)可以在DNA水平更地甚至定量地分析物種的進(jìn)化速度、遺傳距離以及由此推斷系統(tǒng)關(guān)系。近年來，DNA分類法有了很大的發(fā)展，越來越受到人們的重視，已成為古典形態(tài)分類方法的重要補(bǔ)充。因此選擇合適的引物，通過RAPD技術(shù)就可以較容易地把基因內(nèi)部的差異顯示出來，從而為準(zhǔn)確確定物種的分類地位提供依據(jù)。Black等(1992)首先將RAPD技術(shù)用于4種蚜蟲的鑒別比較，他們采用4種10個(gè)堿基的隨機(jī)引物對(duì)4種蚜蟲進(jìn)行RAPD反應(yīng)，檢測(cè)其擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性，結(jié)果表明，根據(jù)電泳譜帶可以區(qū)分4個(gè)種。
同時(shí)，檢測(cè)種內(nèi)不同生物型以及同一生物型內(nèi)不同個(gè)體擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性，種群內(nèi)不同個(gè)體之間擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性。Puterka等(1993)用RAPD技術(shù)對(duì)多個(gè)國家采集的俄羅斯麥蛾Diuraphic noxia Mordvilko進(jìn)行了系統(tǒng)分析，7種引物就產(chǎn)生了69條多態(tài)性條帶，用這一方法可以鑒別所有供試種群；同時(shí)聚類分析表明從南非、墨西哥、法國、土耳其收集的種群與美國種群相似性很大，親緣關(guān)系很近，而中東和俄羅斯南部種群間變異大，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。楊效文等(1999)用RAPD技術(shù)研究了桃樹、油菜和煙草上煙蚜的DNA多態(tài)性其結(jié)果表明，在煙蚜的體色方面，與黃綠色相比，紅色與褐色更為接近。韓雅莉(2001)運(yùn)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA技術(shù)對(duì)斑翅蝗科中3屬6種蝗蟲基因組DNA進(jìn)行了多態(tài)性比較，并根據(jù)各種間片段共享度構(gòu)建了UPG聚類關(guān)系圖。研究結(jié)果表明，大墊尖翅蝗和甘蒙尖翅蝗的片段共享度為0．375。紅翅皺膝蝗和鼓翅皺膝蝗的片段共享度為0．268，亞洲小車蝗和黃脛小車蝗的片段共享度也為0．286。
二、RAPD技術(shù)在昆蟲分子生態(tài)學(xué)研究中的應(yīng)用
昆蟲分子生態(tài)學(xué)是從基因水平上來研究生物之間以及生物與環(huán)境之間的關(guān)系。目前， RAPD技術(shù)在該領(lǐng)域主要用于種群的遺傳變異程度和種群間遺傳分化程度、天敵昆蟲的標(biāo) 識(shí)和鑒定、害蟲生物型鑒別、個(gè)體遺傳標(biāo)記以鑒定親緣關(guān)系以及昆蟲生殖策略的研究。 Roehrdanz等(1993)用RAPD技術(shù)標(biāo)識(shí)了不同地理起源的北美瓢蟲一蚜蟲天敵，為正確地 引進(jìn)天敵、控制蚜蟲的為害起了決定性的作用，同時(shí)指出RAPD技術(shù)可用于區(qū)分關(guān)系近緣的天敵昆蟲，在利用天敵控制害蟲方面有著巨大的經(jīng)濟(jì)意義。陳乃中等(1997)用RAPD技術(shù)鑒定了4種倉庫幼蟲，電泳結(jié)果顯示，用5種引物均產(chǎn)生了可以用于區(qū)分這4種昆蟲的擴(kuò)增譜帶，表明RAPD技術(shù)在昆蟲尤其是幼蟲的快速鑒定中有應(yīng)用前景。
Gawel等(1993)從椰粉虱(Aleyrodinae)的卵和若蟲中提取DNA進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，所用20種引物都能準(zhǔn)確地把椰粉虱的兩種生物型(A型和B型)區(qū)分開。Ban-o等(1997)報(bào)道，用RAPD技術(shù)可以把甘薯粉虱Bemisia inconspicua(Quaintance)的生物型B與其他生物型區(qū)分開，表明RAPD技術(shù)可用于區(qū)分親緣關(guān)系密切的生物類群。Wilkerson(1993)用RAPD標(biāo)記研究了非洲瘧蚊的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)種群，使用57種引物，擴(kuò)增出了377條DNA帶。兩個(gè)種群間有295條帶不同；選取其中產(chǎn)生條帶清晰、重復(fù)性好的13種引物進(jìn)一步對(duì)每個(gè)種30個(gè)個(gè)體的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，其中7種引物擴(kuò)增出的條帶有差異，表明RAPD技術(shù)能有效地檢測(cè)出種群內(nèi)發(fā)生的變異。Blanchetot(1992)利用M13噬菌體DNA探針和珠蛋白基因重復(fù)序列探針，研究苜蓿切葉蜂(Megachile rotundata)的生殖策略，證明了每巢中的后代基本來自單一雌性，且在大多數(shù)情況下雌性只與單一雄性交配。
Lu(1994)將DNA重復(fù)序列標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于秋黏蟲(Spodoptera fragiperda)的研究。該物種兩個(gè)種群的分布區(qū)有部分重疊，其中一個(gè)種群嗜食玉米，另一個(gè)種群則以水稻和飼料用草為食。結(jié)果表明：DNA重復(fù)序列標(biāo)記技術(shù)能將兩個(gè)在形態(tài)上無法區(qū)分的種群*地劃分開。同時(shí)，對(duì)秋黏蟲種群遷飛、種群結(jié)構(gòu)和生殖行為等也作了研究。趙中明等(2001)應(yīng)用RAPD技術(shù)分析了金色果蠅復(fù)合種的5個(gè)姊妹種共12個(gè)地理種群的遺傳變異。在40種10堿基隨機(jī)引物中有30種引物對(duì)每個(gè)種群都可獲得令人滿意的擴(kuò)增結(jié)果，在161個(gè)RAPD標(biāo)記中有129個(gè)呈多態(tài)性，用UPGMA法構(gòu)建了該復(fù)合種的聚類關(guān)系圖。
三、RAPD技術(shù)在害蟲抗藥性中的應(yīng)用
近20年來．為了控制害蟲為害，在農(nóng)作物上大量施用農(nóng)藥．許多害蟲已產(chǎn)生了很強(qiáng)的抗藥性?？顾幮缘漠a(chǎn)生是在殺蟲劑施用量不斷加大的外界環(huán)凌條件下，由于突變和選擇的作用，與抗藥性有關(guān)的遺傳變異在種群中產(chǎn)生和擴(kuò)散的結(jié)果。由于害蟲遺傳學(xué)理論尚不完善和缺乏抗性突變體的診斷技術(shù)等原因，以往對(duì)抗性機(jī)理的研究多局限于生理學(xué)方面，而極少深人到分子水平。RAPD技術(shù)一出現(xiàn)，隨即迅速地被用于害蟲抗性機(jī)理的研究，檢測(cè)抗性遺傳變異，即使在人們對(duì)有關(guān)抗性基因缺乏深入了解的情況下，也可依賴三抗性基因連鎖的DNA多態(tài)性標(biāo)記對(duì)種群的抗性遺傳變異進(jìn)行鑒定。