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PCR假陰性的原因分析
點(diǎn)擊次數(shù)：689 發(fā)布時(shí)間：2016-3-23
PCR的假陽(yáng)性問(wèn)題是在PCR誕生之初就被深刻認(rèn)識(shí)到了，同時(shí)由于造成假陽(yáng)性的因素相對(duì)單一，因此假陽(yáng)性并不是困惑檢驗(yàn)工作的主要原因。如果一個(gè)項(xiàng)目只是陽(yáng)性率高敏感性好的話，那么可以認(rèn)為其陰性結(jié)果具備很高的可排除性，仍然有相當(dāng)?shù)呐R床適用價(jià)值。但PCR的假陰性在檢驗(yàn)工作中仍很?chē)?yán)重，并且用些因素經(jīng)常被人忽略，嚴(yán)重的影響了PCR的使用。可以想象一種假陽(yáng)性和假陰性都很高的項(xiàng)目，有什么樣的診斷價(jià)值。
造成PCR假陰性的原因是復(fù)雜的，也是多樣的。主要有：
1.PCR儀本身的質(zhì)量問(wèn)題。PCR儀設(shè)計(jì)原理上的差異和經(jīng)常出現(xiàn)的質(zhì)量問(wèn)題（如：溫控不準(zhǔn)等）給臨床帶來(lái)了諸如非特異性擴(kuò)增（假陽(yáng)性）、擴(kuò)增效率下降(假陰性）等問(wèn)題.
2.離心機(jī)問(wèn)題。離心機(jī)的質(zhì)量或使用不正確，造成離心標(biāo)本模板沒(méi)有分離出來(lái)造成假陰性，竊以為這是zui易被忽視的問(wèn)題。其時(shí)離心機(jī)使用問(wèn)題不僅在PCR，在整個(gè)檢驗(yàn)工作中都是zui易被忽視的問(wèn)題，只是因?yàn)樵谄渌ぷ髦胁幌驪CR那樣明顯影響檢測(cè)結(jié)果罷了。
離心機(jī)是常用的固液分離設(shè)備，其利用離心過(guò)程中的離心力而將密度不同的物質(zhì)分離出來(lái)。因此離心機(jī)的關(guān)鍵在于離心加速度而不是轉(zhuǎn)速，根據(jù)牛頓定律可知離心力加速度與轉(zhuǎn)速和有效半徑的有關(guān)的，因此對(duì)于不同有效半徑的離心機(jī)相同的轉(zhuǎn)速其離心加速度是不同的，轉(zhuǎn)速的調(diào)節(jié)要因離心機(jī)而異，但很遺憾，日常工作中忽視了這個(gè)問(wèn)題。有效半徑短的離心加速度就小，同樣的時(shí)間離心效果就差可能造成分離不出導(dǎo)致假陰性。同時(shí)由于高速離心機(jī)高速旋轉(zhuǎn)與空氣摩擦?xí)a(chǎn)生大量的熱，因此對(duì)于稱能上幾萬(wàn)轉(zhuǎn)/分而沒(méi)有抽真空的離心機(jī)實(shí)際轉(zhuǎn)速本人持懷疑態(tài)度。
3.試劑開(kāi)殼劑和操作問(wèn)題造成標(biāo)本DNA沒(méi)有暴露出來(lái)，致使擴(kuò)增無(wú)法進(jìn)行，這是造成假陰性的又一主要因素