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神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：564 發(fā)布時(shí)間：2016-12-5
神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長(zhǎng)因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時(shí)，可出現(xiàn)一定程度的分化，長(zhǎng)出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。
人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，不僅能獲得生長(zhǎng)的膠質(zhì)細(xì)胞，也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說(shuō)來(lái)，膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長(zhǎng)不穩(wěn)定，不易自發(fā)轉(zhuǎn)化，但對(duì)外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。
一． 設(shè)備： 無(wú)菌操作設(shè)備。
二． 大型設(shè)備CO2培養(yǎng)箱：恒溫5%、10%CO2維持培養(yǎng)液中pH值。
倒置顯微鏡：用于每天觀察貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
解剖顯微鏡，用于準(zhǔn)確地取材。
常溫冰箱：-4℃，用于保存各種培養(yǎng)液，解剖液和鼠尾膠。
低溫冰箱：-20℃--80℃，用于儲(chǔ)存血清酶，貴重物品和試劑。
電熱干烤箱：用于消毒玻璃器皿。
高壓消毒鍋：用于消毒培養(yǎng)皿，手術(shù)器械。
過(guò)濾器：配制解剖液、培養(yǎng)液，必須過(guò)濾后才可使用，以去除細(xì)菌。
滲透壓儀，pH劑，天平等。
三． 培養(yǎng)器皿及手術(shù)器械
1 培養(yǎng)皿：常用35mm塑料及玻璃皿，解剖取材用15mm-90mm直徑。
2 培養(yǎng)板，24-40孔，可用于開(kāi)放培養(yǎng)。
3 培養(yǎng)瓶：
4 吸管，常用1，5，10ml，均需泡酸、洗滌、滅菌后方可使用。
5 各類(lèi)培養(yǎng)液貯存器。
6 小型手術(shù)器械。
準(zhǔn)備：
一 配制培養(yǎng)液
（1） 解剖液：以無(wú)機(jī)鹽（去除Ca2+, Mg2+）加葡萄糖配制成PBS緩沖液，保持一定的滲透壓和pH值。
（2） 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MEM）：主要為多種氨基酸，加入葡萄糖，雙蒸餾水溶解。
（3） 接種培養(yǎng)液：用于胰酶消化后的細(xì)胞分散，做成細(xì)胞懸液，其成分為MEM含1%谷氨酰胺，另加入10%馬血清，當(dāng)天配制。
（4） 維持培養(yǎng)液：接種后24h，全部換成此液，后每2周換一次，每次換1/2。其成分為MEM中含5%馬血清，1%谷氨酰胺，及適量的支持性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
二 培養(yǎng)基質(zhì) 常用鼠尾膠、小牛皮膠，多聚賴(lài)氨酸，再涂膠
三消毒培養(yǎng)皿的備用。所有培養(yǎng)器皿均需清水沖洗2-3d，達(dá)兩次ddH2O，每遍洗刷3-4次，加塞包裝，置于烤箱中干燥消毒，于培養(yǎng)前1天進(jìn)行。