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酸性磷酸酶（ACP）的顯示實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：1125 發(fā)布時(shí)間：2017-3-27
目的要求
1．熟悉酸性磷酸酶顯示方法的原理及操作步驟
2．觀察酸性磷酸酶在細(xì)胞中的分布
基本原理
酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬細(xì)胞，定位于溶酶體內(nèi)。在溶酶體膜穩(wěn)定完整時(shí)，底物不易滲入，ACP活力微弱或無活性，經(jīng)固定，在合適pH條件下，膜本身變?yōu)椴环€(wěn)定，逐漸改變其滲透性，底物可以滲入，酶活力被顯示。
ACP在酸性條件下（pH4.7）可使作用液中的底物β-甘油磷酸鈉的磷酸根解離出來，進(jìn)而與溶液中*結(jié)合形成磷酸鉛沉淀，因其是難溶解的無色沉淀物，需要與黃色的硫化銨作用，生成棕黑色PBS沉淀而被顯示出來。
β-甘油磷酸鈉→甘油+PO3-
PO4 +Pb(NO3)2→ Pb2(PO4)2
Pb2(PO4)4 +(NH4)2S→PbS
實(shí)驗(yàn)用品
1．器材：注射器、解剖用具、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片
2．試劑：
3%淀粉溶液；ACP作用液；2%硫化銨
3．材料：小鼠腹腔液涂片
免疫動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)前4～6天用無菌注射器取已滅菌的3%淀粉溶液1ml注射于小鼠腹腔內(nèi)，每天一次。
酸性磷酸酶（ACP）的顯示
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酸性磷酸酶（ACP）的顯示
吸取少量腹腔液，在玻片上涂層一薄層，室溫晾干。
酸性磷酸酶（ACP）的顯示
將涂片滴置于溫盒中，滴加適量ACP作用液，37℃作用30分鐘。取出后，蒸餾水漂洗。用10%甲醛鈣溶液后固定5min。
酸性磷酸酶（ACP）的顯示