等度液相色譜分析儀是一種常用的液相色譜分析儀器，其工作原理是基于不同物質(zhì)在固定相和流動相之間的分配系數(shù)不同而實現(xiàn)分離的。在分離過程中，流動相攜帶樣品通過色譜柱，樣品中的各組分在色譜柱上發(fā)生吸附、解吸、擴(kuò)散等過程，從而實現(xiàn)分離。分離后的組分依次進(jìn)入檢測器，檢測器將其轉(zhuǎn)化為電信號，最后由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行處理和分析。
等度液相色譜分析儀主要由輸液泵、檢測器、色譜柱、進(jìn)樣系統(tǒng)以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。其中，輸液泵負(fù)責(zé)提供穩(wěn)定、精確的流動相；檢測器用于檢測樣品組分；色譜柱則是分離樣品的關(guān)鍵部件；進(jìn)樣系統(tǒng)負(fù)責(zé)將樣品注入色譜柱；數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)則負(fù)責(zé)收集、處理和分析檢測數(shù)據(jù)。
等度液相色譜分析儀的操作步驟如下：
1、準(zhǔn)備工作：
檢查儀器狀態(tài)，確保所有連接管路的連接緊固，檢查進(jìn)樣器、檢測器和泵的工作情況。確保試劑瓶中有足夠的溶劑，并檢查柱溫箱和樣品轉(zhuǎn)移系統(tǒng)的溫度設(shè)定。
始終保持高效液相色譜儀器包括內(nèi)在系統(tǒng)的清潔。室內(nèi)溫度始終保持恒定，因為室溫的變化對高效液相色譜檢測器有影響。
2、流動相準(zhǔn)備：
將已經(jīng)過濾并脫氣的流動相注入儲液罐。用流動相沖洗金屬過濾器，然后將過濾器浸入儲液罐的流動相中。
將儲液罐放置在一定的高度，以避免由于搬運(yùn)和其他操作人員的移動而造成不必要的跌落。
3、啟動儀器：
按以下順序依次啟動高效液相色譜儀：泵→檢測器→高效液相色譜軟件→按預(yù)先計劃的方法設(shè)置軟件參數(shù)，如分析時間、檢測波長、流速等。
4、系統(tǒng)排氣與基線穩(wěn)定：
啟動泵，運(yùn)行5分鐘，主要是為了排除系統(tǒng)中的氣泡，結(jié)束后關(guān)閉所有排氣閥。然后按照預(yù)先計劃的速度，以固定的速率（如1mL/min左右）運(yùn)行流動相，走基線，直到基線平穩(wěn)，就可以在計算機(jī)軟件上進(jìn)行監(jiān)視。
5、樣品準(zhǔn)備：
根據(jù)實驗?zāi)康?，?zhǔn)備好待分析的樣品。樣品準(zhǔn)備包括樣品提取和預(yù)處理。提取要求根據(jù)分析物的特性選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，如溶劑萃取、固相萃取等。預(yù)處理包括濾過、稀釋、調(diào)整pH等步驟，確保樣品符合分析要求。
6、進(jìn)樣：
在進(jìn)樣之前，需要通過洗滌進(jìn)樣針和管道以去除前一個樣品的殘留物。進(jìn)樣體積和進(jìn)樣速度根據(jù)樣品的濃度和分析需要進(jìn)行設(shè)定。
7、參數(shù)設(shè)置與進(jìn)樣分析：
基線平穩(wěn)后，在軟件中設(shè)置樣品的運(yùn)行參數(shù)，如流速和分析時間等。分析時間會因樣品、流速、柱長等因素變化。
參數(shù)設(shè)置完畢后，將固定體積的樣品溶液注入進(jìn)樣閥，然后在軟件中啟動注入命令，進(jìn)樣器中的樣品溶液就隨流動相進(jìn)入色譜柱。
8、數(shù)據(jù)監(jiān)測與分析：
通過軟件監(jiān)視各項讀數(shù)，當(dāng)檢測器檢測到樣品所有峰值，停止運(yùn)行并設(shè)置新的進(jìn)樣。在下一個樣品分析前，建議留出5-10分鐘，待流動相通過色譜柱，以便清洗之前樣品的殘留物；確認(rèn)基線穩(wěn)定后，進(jìn)行下一次注射。
9、結(jié)束操作：
分析結(jié)束后，先關(guān)閉檢測器，然后關(guān)閉泵，最后關(guān)閉軟件。
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