狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

            產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

            您好 登錄 注冊

            當(dāng)前位置:
            南京以馬內(nèi)利儀器設(shè)備有限公司>技術(shù)文章>超聲波DNA打斷儀實(shí)驗(yàn)案例

            技術(shù)文章

            超聲波DNA打斷儀實(shí)驗(yàn)案例

            閱讀:3281          發(fā)布時(shí)間:2020-9-8

            實(shí)驗(yàn)案例

            現(xiàn)在的高通量測序平臺(tái)(主要是illumina)在直接測序時(shí)只能測出200bp長度的序列,因此建庫方案是將DNA .片段化為200bp,然后深度測序后,后將序列拼接。我公司自主研發(fā)的非接觸聚能式超聲波DNA打斷儀可以在不接觸樣品的情況下隔著EP管將細(xì)胞DNA鏈至打斷至200bp或是更小。

             

            實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>:將收集的細(xì)胞DNA..片段化

            樣品:鼠源乳腺癌細(xì)胞4T1

            人源肝癌細(xì)胞HepG2

            人源耐藥子宮肉瘤細(xì)胞MES-SA/DX5

             

            實(shí)驗(yàn)步驟:

            • 交聯(lián): 取1皿細(xì)胞(10 cm平皿),10 mL培養(yǎng)基中加入270 uL  37%甲醛,使得甲醛的終濃度為1%,輕輕搖勻,37℃ 孵育10 min。
            • 終止交聯(lián):加甘氨酸至終濃度為0.125 M。550 ul 2.5 M甘氨酸于平皿中。輕輕搖勻,在室溫下放置5 min即可。
            •  棄凈培養(yǎng)基,用冰冷的含1 mM  PMSF 的PBS清洗細(xì)胞2次,每次5-10mL。
            •  加入3 ml冰冷的含1mM  PMSF的PBS,細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞于離心管中,用PBS清洗培養(yǎng)皿兩次,收集到離心管中。
            •  預(yù)冷后2000 rpm離心 5 min收集細(xì)胞。
            •  新鮮配置一定體積的蛋白酶抑制劑復(fù)合物和SDS Lysis Buffer,充分混勻
            •  棄上清,加入一定體積含有蛋白酶抑制劑復(fù)合物SDS Lysis Buffer,重懸細(xì)胞。
            •  冰上放置10min
            •  開啟冷循環(huán)泵,并降溫至4℃以下。
            •  開啟超聲波DNA打斷儀,將程序調(diào)制循環(huán)模式,超聲20s停10s。 
            •  啟動(dòng)機(jī)器至超聲結(jié)束。
            •  加解交聯(lián)試劑65℃ 解交聯(lián)4h以上,可過夜解交聯(lián)。
            •  將超聲過的樣品提取DNA. 片。
            •  1.5%-2%瓊脂糖凝膠電泳15min。
            •  拍照

            人源骨肉瘤細(xì)胞U2OS

            收藏該商鋪

            請(qǐng) 登錄 后再收藏

            提示

            您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

            對(duì)比框

            產(chǎn)品對(duì)比 產(chǎn)品對(duì)比 聯(lián)系電話 二維碼 意見反饋 在線交流

            掃一掃訪問手機(jī)商鋪
            86-025-87132665/66918106
            在線留言