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上海北諾生物科技有限公司
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一、什么樣的客戶適合選用DuoSet ELISA?
主要為客戶篩選高通量的指標(biāo)而設(shè)計(jì)的，適合熟悉ELISA研發(fā)的實(shí)驗(yàn)人員使用。沒有ELISA經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)行ELISA檢測(cè)的客戶不建議使用。
二、DuoSet ELISA Kit 里面一共有多少塊板子？
1個(gè)DuoSet試劑盒包含的試劑可以滿足大約15塊96孔微孔板的檢測(cè)。
三、DuoSet ELISA Kit檢測(cè)的樣本類型是什么？
檢測(cè)樣本類型：細(xì)胞培養(yǎng)的上清液
熟悉ELISA研發(fā)的實(shí)驗(yàn)人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用。如果要決定試劑盒是否可用于組織勻漿（或其它未經(jīng)檢驗(yàn)）的樣本，實(shí)驗(yàn)者先做一個(gè)“摻入和回收預(yù)試驗(yàn)”。
簡(jiǎn)單來說，實(shí)驗(yàn)者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標(biāo)準(zhǔn)，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過的一份同未摻入的一份相比。采用以下的公式來計(jì)算回收率（%）：測(cè)試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來說，回收率在80-120%可認(rèn)為是可接受的。但是，可接受范圍應(yīng)由每一實(shí)驗(yàn)室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細(xì)的“摻入和回收”的實(shí)驗(yàn)步驟，可向我們的技術(shù)服務(wù)部索取。我們也可進(jìn)一步查閱文獻(xiàn)看一看是否有其他試驗(yàn)人員用我們的產(chǎn)品做過不同的樣本，或不同的屬種。
四、DuoSet ELISA Kit包括哪些組分？
DuoSet 包括4種組分：
Ø 捕獲抗體（Capture Antibody）
Ø 檢測(cè)抗體 （Detection Antibody）
Ø 標(biāo)準(zhǔn)品（Recombinant Standard）
Ø 親和素-辣根過氧化物酶（Streptavidin-HRP）
五、DuoSet ELISA Kit需要另行購(gòu)買的輔助試劑有哪些？
PBS:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8.1 mM Na2HPO4, 1.5 mM KH2PO4, pH 7.2 - 7.4, 0.2 µm filtered
Wash Buffer: （Catalog # WA126）, or equivalent
Reagent Diluent*
Blocking Buffer*
Substrate Solution: 1:1 mixture of Color Reagent A （H2O2） and Color Reagent B （Tetramethylbenzidine） （Catalog # DY999）
Stop Solution: 2 N H2SO4 （Catalog # DY994）
Microplates: R&D Systems （Catalog # DY990）, or equivalent
Plate Sealers: ELISA Plate Sealers （Catalog # DY992）, or equivalent
*For the Reagent Diluent and Blocking Buffer recommended for a specific DuoSet ELISA Development Kit, please see the product datasheet.
Wash Buffer: （Catalog # WA126）, or equivalent
Reagent Diluent*
Blocking Buffer*
Substrate Solution: 1:1 mixture of Color Reagent A （H2O2） and Color Reagent B （Tetramethylbenzidine） （Catalog # DY999）
Stop Solution: 2 N H2SO4 （Catalog # DY994）
Microplates: R&D Systems （Catalog # DY990）, or equivalent
Plate Sealers: ELISA Plate Sealers （Catalog # DY992）, or equivalent
*For the Reagent Diluent and Blocking Buffer recommended for a specific DuoSet ELISA Development Kit, please see the product datasheet.
六、客戶使用了DuoSet ELISA開發(fā)系統(tǒng)，但幾乎就沒有顏色產(chǎn)生。哪些步驟可能出了問題？
很多方面都會(huì)影響到顏色的產(chǎn)生。比如：
1） BSA的干擾。選擇不含脂肪酸的ELISA級(jí)別的BSA很重要，可以降低球蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾。R&D Systems建議使用millipore的BSA（目錄#82-045）。
2） 非室溫下的試劑在使用時(shí)會(huì)抑制信號(hào)；如果室溫過低，信號(hào)也會(huì)被抑制。
3） 如果使用了未表明為“高結(jié)合性ELISA”的微孔板，捕獲抗體同微孔板的結(jié)合就不牢固，從而導(dǎo)致測(cè)試的顏色產(chǎn)生過低。R&D Systems建議使用R&D（cat#DY990,25pcaks） 或者Costar EIA Plate （cat#2592）。
4） 任何試劑，如果配制出錯(cuò)、儲(chǔ)藏不當(dāng)、或已過期，都將出現(xiàn)這一問題。R&D Systems建議：捕獲抗體、檢測(cè)抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、親和素-辣根過氧化物酶溶解之后必須在都有效期內(nèi)使用完。
5）讀板時(shí)使用的波長(zhǎng)同底物的波長(zhǎng)不一致。
