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巢式PCR
標(biāo)簽： 巢式 PCR
巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），使用兩對(duì)（而非一對(duì)）PCR引物擴(kuò)增完整的片段。*對(duì)PCR引物擴(kuò)增片段和普通PCR相似。第二對(duì)引物稱為巢式引物（因?yàn)樗麄冊(cè)?次PCR擴(kuò)增片段的內(nèi)部）結(jié)合在*次PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次PCR擴(kuò)增片段短于*次擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)方法
- 基本方案
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 由于巢式PCR反應(yīng)有兩次PCR擴(kuò)增，從而降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性（因?yàn)榕c兩套引物都互補(bǔ)的引物很少）增加了檢測(cè)的敏感性；又有兩對(duì)PCR引物與檢測(cè)模板的配對(duì)，增加了檢測(cè)的可靠性。 由于第二套引物位于*輪PCR產(chǎn)物內(nèi)部，而非目的片斷包含兩套引物結(jié)合位點(diǎn)的可能性極小，因此第二套引物不可能擴(kuò)增非目的片斷。這種巢式PCR擴(kuò)增確保第二輪PCR產(chǎn)物幾乎或者*沒有引物配對(duì)特異性不強(qiáng)造成的非特異性擴(kuò)增的污染。
巢式PCR反應(yīng)模式圖 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 基因樣品 |
| 試劑、試劑盒 | PCR緩沖液 Tris·HCl KCl Taq聚合酶 |
| 儀器、耗材 | PCR儀 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 目標(biāo)的DNA模板藍(lán)色的*對(duì)引物結(jié)合。*對(duì)引物也可能結(jié)合到其他具有相似結(jié)合位點(diǎn)的片段上并擴(kuò)增多種產(chǎn)物。但只有一種產(chǎn)物是目的片斷（圖中未顯示可能的多種產(chǎn)物）。
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| 注意事項(xiàng) | 1. 引物設(shè)計(jì)原則：每個(gè)特異性引物為24~26個(gè)堿基，Tm：64-65%，GC：44-55% 。這樣你可以同時(shí)做多個(gè)不同的TAIL PCR。
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| 其他 | 1. 圖解
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