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臍帶血干細胞的準備
試劑和材料:
1.運輸培養(yǎng)基:Eagle基礎培養(yǎng)基(EBM),添加300U/ml青霉素和300μg/ml鏈霉素,150μg/ml慶大霉素和1μg/ml兩性霉素B;
2.夾子;
3.剪刀;
4.抗凝劑:CPDA-1:122mmol/L(26g/L)枸櫞酸鈉,0.142mol/L(25.5g/L)葡萄糖,15.6 mmol/L(3.0g/L)枸櫞酸和18.3 mmol/L(2.2g/L)磷酸二氫鈉;
5.etadine﹡或70%乙醇;
6.18號注射器針頭;
7.臍帶收集袋,175ml,含24.5ml CPDA-1;
8.50ml注射器,含200I.U.肝素
實驗方法:
1.出生后,用兩個夾子在近新生兒的末端和近胎盤的末端夾住臍帶以封閉臍帶;
2.剪下兩個夾子間的臍帶,一端在接近新生兒處,另一端剪去胎盤;
3.剪下臍帶后放入運輸培養(yǎng)基中送去實驗室,整個處理過程在6-12h內(nèi);
4.用Betadine或70%酒精的棉花擦拭針頭插入位點,位點在臍帶近胎兒末端;
5.為了收集到zui大量的臍血,臍帶的處理動作要盡可能?。?br>6.接著用收集袋或50ml注射器的針頭插入步驟2中處理好的臍靜脈插入位點;
7.將收集袋保持在低于插入位點的水平,以利于臍血在重力作用下流入容器中,或者用50ml注射器緩慢地將臍血從臍靜脈內(nèi)抽出。盡可能多地收集臍血,一般能收集到60-150ml;
8.如果出現(xiàn)靜脈滑脫,可沿臍帶稍上處用Betadine或70%酒精消毒后重新插入針頭;
9.血流停止后,打開針頭安全帽,將它推入鎖定位置。注意:臍血應該保存于室溫,不要冷藏;
10.如果使用袋裝,用附帶的卡環(huán)夾住管子,盡可能接近血袋處打兩個安全結以防止泄露,然后剪去針頭,將針頭放入尖頭容器中丟棄;
11.輕輕轉(zhuǎn)動血袋或注射器幾次,使臍血與抗凝劑充分混合;