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            上海北諾生物科技有限公司

            中級(jí)會(huì)員·14年

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            人類染色體核型分析

            2015-3-23  閱讀(1605)

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            實(shí)驗(yàn)原理


            核型(karyotype)一詞在20世紀(jì)20年代首先由蘇聯(lián)學(xué)者T. A. Levzky等人提出。核型分析的發(fā)展有三項(xiàng)技術(shù)起了很重要的促進(jìn)作用,一是1952年美籍華人細(xì)胞學(xué)家徐道覺(jué)發(fā)現(xiàn)的低滲處理技術(shù),使中期細(xì)胞的染色體分散良好,便于觀察;二是秋水仙素的應(yīng)用便于富集中期細(xì)胞分裂相;三是植物凝集素(PHA)刺激血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、分裂,使以血培養(yǎng)方法觀察動(dòng)物及人的染色體成為可能。

            核型是指染色體組在有絲分裂中期的表型,包括染色體數(shù)目、大小、形態(tài)特征等。核型分析是對(duì)染色體進(jìn)行測(cè)量計(jì)算的基礎(chǔ)上,進(jìn)行分組、排隊(duì)、配對(duì)并進(jìn)行形態(tài)分析的過(guò)程。核型分析對(duì)于探討人類遺傳病的機(jī)制、物種親緣關(guān)系與進(jìn)化、遠(yuǎn)緣雜種的鑒定等都有重要意義。將一個(gè)染色體組的全部染色體逐個(gè)按其特征描繪下來(lái),再按長(zhǎng)短、形態(tài)等特征排列起來(lái)的圖像稱為核型模式圖,它代表一個(gè)物種的核型模式。

            1960年,丹佛會(huì)議上,提出了人類有絲分裂染色體命名標(biāo)準(zhǔn)體制草案,為以后的所有命名方法奠定了基礎(chǔ)。1963年,倫敦會(huì)議上,正式批準(zhǔn)Patan 提出的A、B、C、D、E、F、G七個(gè)字母表示七組染色體的分類法。1966年,芝加哥會(huì)議上,提出人類染色體組和畸變速記符號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)命名體制。

            A組(1-3號(hào))

            1號(hào):zui大的中央著絲粒染色體,長(zhǎng)臂靠近著絲粒外有次縊痕。

            2號(hào):zui大的亞中著絲粒染色體。

            3號(hào):中央著絲粒染色體,比1號(hào)小三分之一。

            B組(4-5號(hào)):為較大的亞中央著絲粒染色體,二者不易區(qū)分。

            C組(6-12號(hào),X):中等近中央著絲粒染色體,彼此難區(qū)分。

                6、7、9、11號(hào):著絲粒略近中央。

                8、10、12號(hào):偏離中央。

                9號(hào):q有次縊痕。

                X位于6、7之間。

            D組(13-15號(hào)):中等近端著絲點(diǎn)染色體,p常有隨體。

            E組(16-18號(hào))

                16號(hào):中等中央著絲粒染色體,q上有次縊痕。

                17號(hào):較小,近中央著絲粒染色體。

                18號(hào):較小,近中央著絲粒染色體,p比17號(hào)更短。

            F組(19-20號(hào)):小的中央著絲粒染色體,彼此不易區(qū)分。

            G組(21-22號(hào),Y):小的近端著絲粒染色體。

                21、22號(hào):p常有隨體,q常呈分枝狀彼此不易區(qū)分。

                Y:p無(wú)隨體,q通常平行靠近。



            錨點(diǎn)

            實(shí)驗(yàn)試劑

            Geimsa染色液等。

            錨點(diǎn)

            實(shí)驗(yàn)設(shè)備

            攝影顯微鏡,顯微測(cè)微尺,染色缸,吹風(fēng)機(jī)等。

            錨點(diǎn)

            實(shí)驗(yàn)材料

            人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本

            錨點(diǎn)

            實(shí)驗(yàn)步驟


            1、將人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本放入染色缸,用Geimsa染色液染色10-15分鐘→在盛水塑料杯中沖涮→風(fēng)干→鏡檢

            觀察細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為:

            (1)細(xì)胞完整,輪廓清晰,染色體分布在同一水平面上。

            (2)染色體形態(tài)和分布良好。

            (3)無(wú)重疊,即使有個(gè)別重疊,也要能明確辯認(rèn),以免差錯(cuò)。

            (4)所觀察的細(xì)胞處于同一有絲分裂階段,即染色體螺旋化程度或染色體長(zhǎng)短大致一樣。

            (5)在所觀察的細(xì)胞周圍,沒(méi)有離散的單個(gè)或多個(gè)染色體存在,以免影響計(jì)數(shù)。


            2、顯微攝影:將制好的片子放在數(shù)碼攝影顯微鏡下進(jìn)行拍攝,以供分析。

            3、核型分析

            核型:一個(gè)細(xì)胞內(nèi)所有染色體按一定順序排列起來(lái),代表著某一個(gè)體所有細(xì)胞的染色體組成,包括數(shù)目、形態(tài)、大小等,分為A、B、C、D、E、F、G等七組和一組性染色體。

            組型:把核型按模式圖的形式表現(xiàn)出來(lái),代表一個(gè)種的染色體組成。

            4、完成染色體組型分析。



            錨點(diǎn)

            注意事項(xiàng)


            顯微照片分析:

            染色體計(jì)數(shù);染色體測(cè)量;

            相對(duì)長(zhǎng)度=單個(gè)染色體長(zhǎng)度/ 整套單倍染色體總長(zhǎng)×100

            臂比率=q/p

            著絲點(diǎn)指數(shù)=p/(p q) ×100 

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