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標簽：枯草芽孢桿菌感受態(tài)細胞制備枯草芽孢桿菌感受態(tài)細胞的制備可以：（1）用于建立枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化體系；（2）用于其基因改造；（3）用于提高枯草芽孢桿菌生產(chǎn)性能相關(guān)研究。實驗方法化學法化學改進法實驗材料枯草芽孢桿菌168試劑、試劑盒SPI培養(yǎng)基EGTASPII培養(yǎng)基檸檬酸鈉EGTA氫氧化鈉KH2PO4K2HPO4MgCl2MgSO4葡萄糖酵母膏（NH4）2SO4儀器、耗材培養(yǎng)箱培養(yǎng)皿錐形瓶紫外分光光度計接種環(huán)離心管實驗步驟一、試劑配制1.SP鹽0.2%（NH4）2SO4，1.4%K2HPO4，0.
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標簽：酵母感受態(tài)細胞制備酵母感受態(tài)細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉(zhuǎn)化體系；（2）用于酵母表達系統(tǒng)構(gòu)建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法化學法試劑盒制備法實驗材料釀酒酵母試劑、試劑盒YPDA液體培養(yǎng)基蒸餾水甘油二甲基亞砜儀器、耗材培養(yǎng)皿離心機離心管冰箱實驗步驟一、試劑與耗材1.試劑細菌用-酵母提取物（Fisher）、細菌用-蛋白胨（Fisher）、葡萄糖（Fisher）、細菌用-瓊脂粉、去離子水、甘油（Sigma）、二甲基亞砜（Sigma）、聚乙二醇3350（Sigma）、醋酸鋰（Si
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氯化鈣法電轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌感受態(tài)實驗方法原理在基因工程操作中，感受態(tài)細胞的制備和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化是一項基本技術(shù)。感受態(tài)是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態(tài)。農(nóng)桿菌的感受態(tài)可用CaCl2處理而誘導產(chǎn)生。將正在生長的農(nóng)桿菌細胞加入到低滲的CaCl2溶液中，0℃下處理便會使細菌細胞膜的透性發(fā)生改變，此時的細胞呈現(xiàn)出感受態(tài)。制備好的農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞迅速冷凍于-70℃可保存相當一段時間而不會對其轉(zhuǎn)化效率有太大的影響。實驗材料土壤農(nóng)桿菌LBA4404菌株試劑、試劑盒YEB液體培養(yǎng)基酵母提取物牛肉膏蛋白胨蔗
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大腸桿菌感受態(tài)細胞制備、重組DNA的轉(zhuǎn)化、克隆篩選
1.實驗目的和要求通過本實驗學習氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細胞和外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù)。了解細胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學研究中的意義。2.相關(guān)知識及原理感受態(tài)細胞（Competentcells）：受體細胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學試劑法）的處理后，細胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細胞（competentcell）。轉(zhuǎn)化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細胞株系，使受體細胞獲得新的 -
細胞凍存和復蘇實驗標簽：細胞凍存復蘇細胞凍存和復蘇可以：（1）用于生物學保種；（2）用于醫(yī)學上干細胞研究；（3）用于傳代培養(yǎng)。詳細實驗方法細胞凍存和復蘇實驗方法原理細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免
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PCR技術(shù)可用于：（1）檢驗感染性疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)；（2）有效檢測癌基因的突變，準確檢測癌基因的表達量；（3）臨床應用于檢測地中海貧血的基因突變。詳細實驗方法PCR技術(shù)實驗方法原理PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應做準備；②
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PAGE膠上蛋白質(zhì)的銀染方法有數(shù)百種，其原理相似，具體步驟各不相同。銀染為蛋白質(zhì)的非特異性染色，呈“爆炸性”反應模式，用于蛋白定量時準確性差，但其敏感度高、簡便易行，仍被廣泛應用。下面列舉的這三種方法為常用的雙向電泳凝膠染色法，可與質(zhì)譜兼容。其中方法1敏感性zui高，方法3背景zui低、對比度好。1.Blamsilverstainingprotocol（Modified）程序溶液時間固定40%ETOH10%HAC1小時漂洗30%ETOH2×20min致敏0.02%Na2S2O31min漂洗H2O
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蛋白專題：蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot ）
蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）可以：（1）從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標蛋白質(zhì)；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質(zhì)的表達情況；（3）用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。實驗方法底物化學發(fā)光ECL法實驗方法原理Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Weste
