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基本介紹
Ames試驗全稱污染物致突變性檢測。
污染物對人體的潛在危害，引起人們的普遍關(guān)注。世界上已發(fā)展了百余種短期快速測試法，檢測污染物的遺傳毒性效應(yīng)。B．N．Ames等經(jīng)十余年努力，于1975年建立并不斷發(fā)展完善的沙門氏菌回復(fù)突變試驗（亦稱Ames試驗）已被世界各國廣為采用。該法比較快速、簡便、敏感、經(jīng)濟(jì)，且適用于測試混合物，反映多種污染物的綜合效應(yīng)。眾多學(xué)者有的用Ames試驗檢測食品添加劑、化妝品等的致突變性，由此推測其致癌性；有的用Ames試驗檢測水源水和飲用水的致突變性（比如，美國派斯凈水器就通過了Ames試驗），探索較現(xiàn)行方法更加衛(wèi)生安全的消毒措施；或檢測城市污水和工業(yè)廢水的致突變性，結(jié)合化學(xué)分析，追蹤污染源，為研究防治對策提供依據(jù)；有的檢測土壤、污泥、工業(yè)廢渣堆肥、廢物灰燼的致突變性，以防止維系生命的土壤受致突變物污染后，通過農(nóng)作物危害人類；檢測氣態(tài)污染物的致突變性，防止污染物經(jīng)由大氣，通過呼吸對人體發(fā)生潛在危害；用Ames試驗研究化合物結(jié)構(gòu)與致變性的關(guān)系，為合成對環(huán)境無潛在危害的新化合物提供理論依據(jù)；檢測農(nóng)藥在微生物降解前后的致突變性，了解農(nóng)藥在施用后代謝過程中對人類有無隱患；還有用Ames試驗篩選抗突變物，研究開發(fā)新的抗癌藥等等。
編輯本段目的和原理
鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）的組氨酸營養(yǎng)缺陷型（his－）菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復(fù)突變的細(xì)胞外，一般只能分裂幾次，形成在顯微鏡下才能見到的微菌落。受誘變劑作用后，大量細(xì)胞發(fā)生回復(fù)突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見的菌落。某些化學(xué)物質(zhì)需經(jīng)代謝活化才有致變作用，在測試系統(tǒng)中加入哺乳動物微粒體酶，可彌補(bǔ)體外試驗缺乏代謝活化系統(tǒng)之不足。鑒于化學(xué)物質(zhì)的致突變作用與致癌作用之間密切相關(guān)，故此法現(xiàn)廣泛應(yīng)用于致癌物的篩選。
編輯本段步驟和方法
Ames試驗的常規(guī)方法有斑點試驗和平板摻入試驗。
1．菌株鑒定 用于測試的菌株，需經(jīng)基因型和生物學(xué)性狀鑒定，符合要求才能投入使用。
目前推薦使用的一套菌株是TA97、TA98、TA100和TA102。鑒定前先進(jìn)行增菌培養(yǎng)。為鑒定結(jié)果可靠，需同時培養(yǎng)野生型TV菌株，作為測試菌基因型之對照。增菌培養(yǎng)用牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接種后于37℃，100r/min振蕩培養(yǎng)12h左右，細(xì)菌生長相為對數(shù)期末，含菌數(shù)應(yīng)為1×109個/ml～2×109個/ml。
鑒定項目：
（1）脂多糖屏障丟失（rfa）用接種環(huán)或一端撓起的接種針以無菌操作術(shù)取各菌株的增菌培養(yǎng)液，在營養(yǎng)瓊脂平板上分別劃平行線，然后用滅菌尖頭鑷夾取滅菌濾紙條，浸濕結(jié)晶紫溶液，貼放在平板上與各接種平行線垂直相交。蓋好皿蓋后倒置于37t溫箱，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。
（2）R因子 劃線接種，貼放濾紙條及培養(yǎng)等均同上，唯濾紙條浸濕的藥液不同，為氨芐青霉素鈉溶液。TA102除pKM101外，還有pAQ1，載有抗四環(huán)素的基因，故另用濾紙條浸濕四環(huán)素溶液后貼放于劃線接種的平板上。
（3）紫外線損傷修復(fù)缺陷（△uvrB）在營養(yǎng)瓊脂平板上按上述方法劃線接種后，一半接種線用黑玻璃遮蓋，另一半暴露于紫外光下8sec，然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿，防止可見光修復(fù)作用。培養(yǎng)同上。
（4）自發(fā)回變 預(yù)先制備底平板；向滅菌并在水浴內(nèi)保溫45℃的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液；混勻后傾于底平板上并鋪平。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h。
（5）回變特性——診斷性試驗 上層軟瓊脂中除菌液外，還注入已知陽性物之溶液，需活化系統(tǒng)者并加入S9mix，余同上。
組氨酸營養(yǎng)缺陷型由自發(fā)回變即可知。
2．斑點試驗 吸取測試菌增菌培養(yǎng)后的菌液0.1ml，注入融化并保溫45℃左右的上層軟瓊脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混勻，傾于底平板上，鋪平冷凝。用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣，紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態(tài)受試物，貼放于上層培養(yǎng)基的表面。同時做溶劑對照和陽性對照，分別貼放于平板上相應(yīng)位置。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h。在紙片外圍長出密集菌落圈，為陽性；菌落散布，密度與自發(fā)回變相似，為陰性。
3．平板摻入試驗 將一定量樣液和0.1ml測試菌液均加入上層軟瓊脂中，需代謝活化的再加0.3ml－0.4ml S9mix，混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝。同時做陰性和陽性對照，每種處理做3個平行。試樣通常設(shè)4個～5個劑量。選擇劑量范圍開始應(yīng)大些，有陽性或可疑陽性結(jié)果時，再在較窄的劑量范圍內(nèi)確定劑量反應(yīng)關(guān)系。培養(yǎng)同上。同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比，為致變比（MR）。MR值≥2，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系，背景正常，則判為致突變陽性。
