本產(chǎn)品測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，DON與抗體結(jié)合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。z后采用甲醇洗脫DON，然后進(jìn)行相關(guān)分析。
凈化過程
注意：整個(gè)純化過程盡量不要讓柱子干燥!
3mL柱管取出上方堵頭，減去上堵頭螺紋下突出部分，插回柱子上，另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上(柱管內(nèi)偶見有小氣泡屬正?，F(xiàn)象，不影響親和柱的使用);
準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液，注入針筒中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;
用20mL水沖洗柱子(對(duì)于飼料及玉米加工副產(chǎn)品等顏色較深的樣液，先用10mL0.1%吐溫20-PBS清洗，再用10mL10%甲醇-水沖洗柱子，z后用10mL水沖洗柱子。)，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體;
準(zhǔn)確加入1.5mL甲醇(色譜級(jí))洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體。收集全部洗脫液，進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。
嘔吐毒素免疫親和柱的檢測(cè)方法
IAC-HPLC法檢測(cè)
過有機(jī)濾膜(孔徑0.22μm)后，直接HPLC測(cè)定;或在50℃下用氮?dú)饩従彽卮抵两?，加入流?dòng)相混勻，過有機(jī)濾膜(孔徑0.22μm)后，參照GB5009.111-2016或GB/T30956-2014條件進(jìn)行HPLC測(cè)定。
使用注意事項(xiàng)
(1)嘔吐毒素對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。
(2)不要使用過有效期的免疫親和柱。
(3)免疫親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。
(4)使用前，免疫親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。
(5)HPLC液相測(cè)定值、試劑盒計(jì)算值接近z高檢出值時(shí)，樣本的實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿，建議減少上樣體積重新過柱。
(6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整，建議z低不少于10g樣。
以上便是今天關(guān)于嘔吐毒素免疫親和柱的凈化檢測(cè)方法及需要注意的地方的全部分享了，希望對(duì)大家今后使用本設(shè)備能有幫助。
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