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• 原理

本試劑盒采用Protein A和protein G純化法。Protein A/G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合。Protein A/G 作為配基可以被偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，當(dāng)抗血清從中流過(guò)時(shí)，特異性的IgG就與配基結(jié)合，其他雜蛋白則穿流而過(guò)。因兩種蛋白純化抗體時(shí)對(duì)不同宿主的抗體的結(jié)合能力不同，需要具體選擇protein A 或者protein G，或者是protein A/protein G組合。一般推薦小鼠單抗IgG2a，IgG2b，IgG3，兔，人，豬的多克隆抗體用protein A純化，而小鼠單抗IgG1，大鼠單抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗體則選擇用protein G純化。

• 產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 試劑盒內(nèi)含有分析所需的所有必需試劑，操作簡(jiǎn)單便捷；
2. 試劑盒內(nèi)組分經(jīng)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，確保更高的檢測(cè)靈敏度；
3. 保存條件：2-8℃。
4. 規(guī)格：待純化抗體1-5ml

三、所需材料

儀器：離心管（1.5 mL、50mL）、0.45µm濾膜、注射器、氣流控制器

試劑：去離子水

四、 試劑盒組成

• 純化步驟

1. 樣品準(zhǔn)備：將抗血清與B液1:5混合，用0.45µm濾膜過(guò)濾（防止堵塞柱子）。
2. 平衡柱子：用10mL去離子水洗去F液，再用5-10倍體積的B液過(guò)A柱。
3. 上樣：將準(zhǔn)備好的血清樣品上樣，控制流速20s/滴。
4. 洗脫雜蛋白：用B液洗柱子，直至結(jié)合液中不含蛋白。
5. 收集抗體：用C液過(guò)柱，同時(shí)收集漏出液(約0.5-1m1/管)， 直至漏出液中不含蛋白。
6. 測(cè)定各收集管中的蛋白含量，合并蛋白管。（注意：收集管中需事先加入約10-200u1的D液，防止抗體在過(guò)酸的環(huán)境下失活）
7. 柱子再生：用5-10倍體積的E液再生柱子。
8. PBS 透析收集的抗體。

• 注意事項(xiàng)

1. 待純化抗血清及試劑盒溶液根據(jù)體積大小需要回溫1-3小時(shí)。
2. 根據(jù)柱子的結(jié)合能力考慮上樣量的體積。
3. 將所純化的抗體加入10%-20%的甘油置于-20攝氏度或者-80攝氏度即可長(zhǎng)期保存。