CellWorld細(xì)胞凍存液的儲(chǔ)存條件
溫度:CellWorld細(xì)胞凍存液通常需要在-20℃避光條件下儲(chǔ)存,以確保其穩(wěn)定性和有效期(一般為24個(gè)月)。在初次融化后,若未使用完畢,可在2~8℃避光條件下保存至少1個(gè)月,少量蛋白析出不影響凍存效果。
容器:CellWorld細(xì)胞凍存液通常以50ml/瓶的規(guī)格提供,應(yīng)確保容器密封良好,避免污染。
使用方法
細(xì)胞準(zhǔn)備:
在凍存前,請(qǐng)確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,這是細(xì)胞凍存的最佳時(shí)期。
移除舊培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞兩次,以去除殘留的血清和代謝產(chǎn)物。
使用胰酶消化細(xì)胞,制備成細(xì)胞懸液。
細(xì)胞計(jì)數(shù)與凍存液配制:
對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù),以確定細(xì)胞總數(shù)和所需細(xì)胞凍存液的量。
細(xì)胞的凍存密度通常建議為1×107 cells/mL。
根據(jù)細(xì)胞數(shù)量,計(jì)算出所需的細(xì)胞凍存液體積。
細(xì)胞凍存:
將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)碾x心管中,進(jìn)行離心以收集細(xì)胞。
棄去上清液,加入適量的CellWorld細(xì)胞凍存液,輕輕吹打以重懸細(xì)胞。
將細(xì)胞懸液分裝至無(wú)菌細(xì)胞凍存管中,每管通常含1~10×10^6 cells/mL。
密封并標(biāo)記凍存管,注明細(xì)胞名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。
按照常規(guī)操作流程,將凍存管依次置于4℃、-20℃、-80℃進(jìn)行逐級(jí)降溫,或直接置于-80℃冰箱中儲(chǔ)存至少一年;或者-80℃過(guò)夜后,次日將細(xì)胞投入液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。在液氮中,細(xì)胞可保存數(shù)年或更長(zhǎng)時(shí)間。
注意事項(xiàng):
在整個(gè)凍存過(guò)程中,請(qǐng)盡量在冰袋附近操作,以保持低溫環(huán)境,避免保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞造成損傷。
請(qǐng)確保細(xì)胞凍存管密封,避免在復(fù)蘇過(guò)程中因壓力變化導(dǎo)致凍存管炸裂。
在取用凍存液時(shí),應(yīng)在超凈工作臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作,確保無(wú)菌條件。
復(fù)蘇細(xì)胞時(shí),應(yīng)從液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出凍存管,立即放入37℃水浴中快速解凍,避免冰晶重新結(jié)晶而造成細(xì)胞死亡。
CellWorld細(xì)胞凍存液以其高效、穩(wěn)定、方便的特點(diǎn),為細(xì)胞保存提供了可靠的解決方案。在使用時(shí),請(qǐng)嚴(yán)格按照上述方法和注意事項(xiàng)進(jìn)行操作,以確保細(xì)胞的存活率和穩(wěn)定性。
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