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            上海橋星貿(mào)易有限公司

            無內(nèi)毒素快速質(zhì)粒中量提取試劑盒

            時間:2013-2-27閱讀:1435
            分享:

            英文名稱:EndoFree plasmid ezFlow midi kit

            中文名稱 :無內(nèi)毒素快速質(zhì)粒中量提取試劑盒

            編號:PD1420-01

            規(guī)格: 10次

            品牌:biomiga

            說明 :

            產(chǎn)品組成

            Catalog #

            PD1420-00

            PD1420-01

            PD1420-02

            Preps

            2

            10

            25

            EzBindTM Columns

            2

            10

            25

            Buffer A1

            6 mL

            30 mL

            70 mL

            Buffer B1

            6 mL

            30 mL

            70 mL

            Buffer N3

            3 mL

            15 mL

            30 mL

            Buffer KB

            12 mL

            60 mL

            135 mL

            Buffer RET

            12 mL

            60 mL

            135 mL

            Endofree Elution Buffer

            3 mL

            15 mL

            40 mL

            RNase A (20 mg/mL)

            0.6 mg

            (30 µL

            3 mg

            (150 µL

            7 mg

            (350 µL

            User Manual

            1

            1

            1

             
            保存條件:

            RNAse A4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 4℃保存,其它組分室溫保存。

            注意事項(xiàng):

            1. 質(zhì)??截悢?shù): 純化中低拷貝的質(zhì)粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash BufferEndofree Elution Buffer.

            2. 轉(zhuǎn)化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養(yǎng)后,再重新挑選新的單個菌落進(jìn)行培養(yǎng)。

            3. 切勿直接取凍存的菌進(jìn)行培養(yǎng)。

            操作簡明步驟:

            1. 50 µL新鮮的菌液接種到15-50 mL (勿超過 50 mL)的LB培養(yǎng)基(含適量抗生素),37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。

            2. 加入2.5 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。

            3. 加入2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。

            4. 加入1 mL Buffer N3, 立即反轉(zhuǎn)5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。

            5. 將裂解液轉(zhuǎn)移至高速離心管,室溫下在12,000 x g 離心10分鐘。

            6. 轉(zhuǎn)移上清液5 mL向裂解液中加入1倍體積的Buffer RET (即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET),及3 mL的100% ethonal,用手用力甩5次以混勻,需馬上離心過DNA柱。

            7. 立即轉(zhuǎn)移6 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中,室溫下5,000 x g離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步直至所有的溶液通過DNA柱。

            8. 可選:向離心柱中加入5 mL Buffer KB,室溫下5,000 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。

            9. 向離心柱中加入5 mL 70% 乙醇,室溫下5,000 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“9”。

            10. 將離心柱放回高速離心機(jī)中,室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘,以*去除殘留的乙醇。

            11. 將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的15 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入1 mL Endofree Elution Buffer, 室溫放置1分鐘,5,000 x g 離心5分鐘,以洗脫質(zhì)粒DNA。

            12. 15 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘,5,000 x g 離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。

            操作流程:

             

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