Sephadex LH-20使用說明
北京英萊克科技提供的美國GE Sephadex LH-20是由葡聚糖G-25羥丙基化加工而成，屬于分子篩凝膠，尤其適用于天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化。例如：類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等，Pharmadex LH-20同時適用于分子類別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備，既可用于初步純化步驟，也可用于zui終精制步驟，如非對映同分異構(gòu)體的分離。
制備凝膠懸浮液
Sephadex LH-20在使用之前必須進行溶脹。在溶脹的過程中，要盡量避免過分攪拌，否則會破壞球形膠粒，且要避免使用磁力攪拌器。
1． 在室溫下，將凝膠溶脹于層析溶劑中至少三小時，溶脹后膠體積的大小決定于所使用的溶劑系統(tǒng)，請參考后頁之干膠溶脹表計算特定柱體積所需要干膠的量。
2． 使溶脹膠體積沉淀之后占總體積的75%，上層溶劑占25%，這時，懸浮液從一個容器倒入另一容器時膠?？梢苿?。
3． 將溶脹后的凝膠根據(jù)裝柱要求均勻倒入柱內(nèi)，在保證膠粒不變形的前提下，應(yīng)在盡可能高的壓力下裝柱，反壓不要超過1.5ba。
平衡
上樣前，用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止，如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并根據(jù)性質(zhì)確定柱高調(diào)節(jié)器的位置，如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。
洗脫液
為確保延長層析柱的使用壽命，所有的緩沖液都應(yīng)該離心或經(jīng)過0.45um的膜過濾以除去雜質(zhì)。
樣品
樣品體積應(yīng)該占柱總體積的1-2%，同樣在使用之前樣品應(yīng)該離心或經(jīng)過0.45um的膜過濾。
洗脫
洗脫流速應(yīng)根據(jù)情況而定，zui大張性流速約12cm/min（反壓1.5ba），建議流速為1-10cm/h?？傮w來說，較低的流速，具有較高的分辯率。
再生
凝膠再生通常是先用2-3個柱體積的洗脫液進行清洗，如更換洗脫液，則需要重新平衡。
溶脹體積
由于Pharmadex LH-20的溶脹體積依賴于溶劑，所以對于不同直徑的柱可根據(jù)比例增加或減少舊柱體積以便計算出新體積。
新體積=舊體積×（新柱體積/舊柱體積）
表一 干膠溶脹表
溶 劑 | 床體積（mL凝膠/g干膠粉末） |
Dinethyl sulphoxide 二甲亞砜 | 4.4～4.6 |
Pyridine 嘧啶 | 4.2～4.4 |
Water 水 | 4.0～4.4 |
Dimethylformamide 二甲基甲酰胺 | 3.8～4.2 |
Saline 生理鹽水 | 3.9～4.1 |
Methanol 甲醇 | 3.8～4.1 |
Methane dichloride 二氯乙烷 | 3.8～4.1 |
Chloroform1 | 3.8～4.1 |
Propanol 丙醇 | 3.7～4.0 |
Ethanol2 乙醇 | 3.6～3.9 |
Isobutanol 異丁醇 | 3.6～3.9 |
Formamide 甲酰胺 | 3.6～3.9 |
Methylene dichloride 二氯甲烷 | 3.6～3.9 |
Butanol 丁醇 | 3.5～3.8 |
Isopropanol 異丙醇 | 3.3～3.6 |
Tetrahydrofuran 四氫呋喃 | 3.3～3.6 |
Dioxane 二氧雜環(huán)乙烷 | 3.2～3.5 |
Acetone 丙酮 | 2.4～2.6 |
Acetonitrile3 乙腈 | 2.2～2.4 |
Carbon tetrachloride 四氯化碳 | 1.8～2.2 |
Benzene 苯 | 1.6～2.0 |
Ethyl acetate 乙酸乙酯 | 1.6～1.8 |
Toluene 甲苯 | 1.5～1.6 |
1． 包含1％的乙醇。 2．包含1％的苯。 3．溶脹膠體積小于2.5mL／g的溶劑沒有使用價值。
膠的性質(zhì)
排阻極限 | 4－5KD（與所有溶劑有關(guān)） |
上樣量 |
|
吸附模式 | 取決于所需分辨率 |
分子量大小 | 小于總體積的20％ |
正相分配 | 小于總體積的1％ |
膠粒形狀 | 球形，多孔 |
顆粒大?。ǜ桑? | 18－111um（直徑） |
顆粒大小中間值（干） | 70um（直徑） |
顆粒大?。状迹? | 27－163um（直徑） |
顆粒大小中間值（甲醇） | 103um（直徑） |
zui大線性流速 | 720cm／hr |
參考線性流速 | 60cm／hr |
pH的穩(wěn)定性 |
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操作中 | 2－11 |
清洗中 | 2－13 |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 在許多水溶液及有機溶劑系統(tǒng)中都定。在pH2以下或強氧化劑中不穩(wěn)定 |
高壓滅菌 | 121℃可忍受20分鐘 |
操作溫度 | 4℃到40℃ |
保存條件 |
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新填料 | 4－25℃（干燥） |
使用后填料 | 4－8℃，pH6－8，切勿冷凍，加入抑菌劑（如20％乙醇，0.04％疊氮鈉） |
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