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ELISA試劑盒8大特殊樣本處理方法
閱讀：66 發(fā)布時(shí)間：2025-4-21一、唾液樣本
采集規(guī)范
空腹采集，避免進(jìn)食后30分鐘內(nèi)取樣（唾液淀粉酶含量升高干擾檢測(cè)）
使用無菌唾液采集管，避免口腔黏膜細(xì)胞混入
處理流程
樣本收集后立即于-70℃速凍1小時(shí)，冰上融化后10000rpm離心10分鐘取上清短期保存（<7天）可置于4℃，長(zhǎng)期需分裝后存于-80℃（保存期≤2個(gè)月）
二、尿液樣本
采集要求
無菌管收集中段尿，避免微生物污染
樣本體積需≥50μL（適配微量ELISA試劑盒）
預(yù)處理要點(diǎn)
2000-3000rpm離心20分鐘，取上清檢測(cè)；若沉淀復(fù)現(xiàn)需二次離心
高濃度尿素樣本建議1:5 PBS稀釋后檢測(cè)（降低基質(zhì)效應(yīng)）
三、糞便樣本
均質(zhì)化處理
取干燥糞便塊（>50mg）與PBS按1:9（w/v）混合，冰浴超聲破碎后5000×g離心10分鐘
建議添加0.05M EDTA緩沖液（抑制金屬蛋白酶活性）
儲(chǔ)存規(guī)范
分裝后-80℃保存≤2個(gè)月，避免反復(fù)凍融（凍融次數(shù)≤3次）
四、腦脊液樣本
采集禁忌
需專業(yè)腰椎穿刺獲取，避免血液污染（紅細(xì)胞裂解釋放血紅蛋白干擾檢測(cè)）
采集后30分鐘內(nèi)完成離心處理
離心參數(shù)
2000-3000rpm離心20分鐘，取透明上清液
高脂樣本需超速離心（10000×g，15分鐘）去除脂蛋白干擾
五、胸腹水樣本
細(xì)胞碎片清除
無菌管收集后立即離心（2000-3000rpm，20分鐘）
渾濁樣本可添加1% Triton X-100裂解細(xì)胞（驗(yàn)證對(duì)靶標(biāo)無影響）
儲(chǔ)存條件
分裝后-80℃保存≤3個(gè)月，復(fù)溶時(shí)37℃水浴緩慢解凍
六、組織勻漿樣本
勻漿制備規(guī)范
新鮮組織剪碎后按1:9（w/v）加入預(yù)冷PBS，冰浴勻漿至無可見顆粒
建議添加蛋白酶抑制劑（如1mM PMSF）防止靶標(biāo)降解
離心參數(shù)
5000×g離心5分鐘取上清，脂質(zhì)層用注射器針頭小心吸除
七、細(xì)胞裂解液樣本
裂解關(guān)鍵步驟
貼壁細(xì)胞用預(yù)冷PBS清洗3次后加入RIPA裂解液（含1%蛋白酶抑制劑）
裂解后10000-14000×g離心5分鐘，避免使用含SDS裂解液（干擾包被抗體）
八、精液/陰道分泌物樣本
液化處理
精液樣本需37℃孵育30分鐘液化，4000rpm離心10分鐘取精漿
陰道分泌物需2000-3000rpm離心20分鐘去除上皮細(xì)胞
檢測(cè)優(yōu)化
高黏稠樣本建議1:3 PBS稀釋（降低背景信號(hào)）
驗(yàn)證基質(zhì)效應(yīng)：比較稀釋樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率偏差（偏差>15%需重新處理）
科研場(chǎng)景關(guān)鍵質(zhì)控點(diǎn)
1.抗干擾策略
高脂血癥/溶血樣本：超速離心（12000×g，15分鐘）或脂質(zhì)吸附柱預(yù)處理
蛋白酶污染風(fēng)險(xiǎn)：全程冰上操作，添加廣譜蛋白酶抑制劑
2.穩(wěn)定性驗(yàn)證
凍融實(shí)驗(yàn)：比較新鮮樣本與凍融后樣本OD值差異（CV需<10%）
長(zhǎng)期保存：-80℃樣本每2個(gè)月檢測(cè)一次靶標(biāo)回收率（≥80%為合格）
3.數(shù)據(jù)校準(zhǔn)
高背景值處理：設(shè)置空白孔（僅加樣本稀釋液）扣除本底信號(hào)
濃度超限樣本：梯度稀釋后復(fù)測(cè)，選取OD值落在線性區(qū)間內(nèi)的稀釋度