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試劑盒檢測方法內(nèi)容包括了哪些？
閱讀：1473 發(fā)布時間：2014-9-18 根據(jù)小鼠elisa試劑盒的檢測目的和操作方式的分析來看有三種基本方法，且在實驗前要有相關(guān)的準備與了解，那么試劑盒的檢測方法內(nèi)容包括了哪些呢？上海滬鼎說給您聽：
1. 雙抗體(原)夾心法：
檢測抗原(體)的常見方法，應(yīng)用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原，不能測 小分子半抗原)。
2. ELISA試劑盒間接法：
檢測抗體的方法，利用酶標記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結(jié)合的抗體。
3. 競爭法檢測：
抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標抗原就越少，顯色越淺，二者呈負相關(guān)。
·ELISA試劑盒分類有這兩種
1. 采用雙抗體二步夾心法測定標本中各種動物相關(guān)指標的水平。
2. 采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。
ELISA試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領(lǐng)域。影響因素較多，加強質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。
·在小鼠elisa試劑盒實驗開始之前，您需要準備：
1. 應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
2. 準備各種實驗儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等。
3. 濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1：19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液。
4. 濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1：4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液。
5. 用ELISA試劑盒應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品，按照1：100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用。
·ELISA試劑盒洗滌次數(shù)的經(jīng)驗法則
洗滌次數(shù)越多，背景越低。太多次的洗滌會降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過ELISA板的商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言，商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個孔能容納330至460μl。不過，有些自動化洗板機可設(shè)置程序，分配遠遠超出這個量的洗滌液，比如1ml。它是如何做到的呢？上海滬鼎生物技術(shù)表明：其實很簡單，就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會溢出到其他孔中。
·ELISA試劑盒抽吸
還有一些參數(shù)會影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整，以降低背景和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體，它們會增加背景信號。殘留量越小，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
吸液高度會明顯影響殘留量；如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大，那就會讓殘留量急劇增加。反之，如果試劑盒洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會使吸液效率降低，殘留量增加。
