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今日主題：ELISA成功的原因重在點(diǎn)子上
閱讀：1149 發(fā)布時(shí)間：2015-3-30[導(dǎo)讀] ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因有哪些？您的實(shí)驗(yàn)思路是怎樣的？ELISA試劑盒作為上海滬鼎生物公司主營(yíng)且熱銷(xiāo)的產(chǎn)品之一，ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)問(wèn)題必然是售后服務(wù)中的一大焦點(diǎn)。日前上午9時(shí)，我公司展開(kāi)2015酶聯(lián)免疫技術(shù)交流會(huì)，會(huì)議主題也正是我公司今日資訊主題：ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子"上。
會(huì)中，我公司技術(shù)總監(jiān)表示：從標(biāo)本的采集到實(shí)驗(yàn)操作步驟完畢，每一個(gè)流程都是影響實(shí)驗(yàn)的因素。當(dāng)然，這是在試劑盒質(zhì)量保證且正確保存的條件下。為什么說(shuō)ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子"上？只要每一步流程都能夠達(dá)到正確的“點(diǎn)"上，那么您定能夠做出的實(shí)驗(yàn)。
一、檢測(cè)標(biāo)本的收集
①收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管?！ ?/span>
②血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本?！ ?/span>
③標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
④標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-70℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，3-6月內(nèi)檢測(cè)。
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
二、不斷學(xué)習(xí)ELISA操作技巧
1.操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度（保持在18 C～25℃）、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問(wèn)污染，導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。
4.要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯(cuò)誤。
5.顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強(qiáng)。
三、操作示意圖
操作指南：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果
四、OD值的范圍
在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的，不容小覷。說(shuō)到OD值范圍，我公司業(yè)務(wù)員在售后問(wèn)題的處理過(guò)程中也常會(huì)有客戶咨詢其范圍是多少。其實(shí)是不一定的，我們以AβELISA為例，2以上就會(huì)偏飽和，變化不容易做出來(lái)，所以一般把model組控制在0.8-1.5，而control組的話基本跟空白差不多，不到0.1。
所以，一般情況下我們會(huì)建議先做個(gè)標(biāo)曲以及樣品的梯度稀釋，然后選擇在標(biāo)曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。
同時(shí)，也與使用的detector有關(guān)，detector有自己的檢測(cè)范圍和線性范圍。如果實(shí)驗(yàn)室使用的儀器，說(shuō)明書(shū)上說(shuō)檢測(cè)范圍是0~4，線性范圍是0~3，但我們自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測(cè)空白的沒(méi)有經(jīng)過(guò)處理的Elisa孔，大致在0左右。
上海滬鼎生物公司ELISA試劑盒提供專業(yè)的全程技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)及免費(fèi)代檢測(cè)服務(wù)，助您的實(shí)驗(yàn)一臂之力！新品試劑盒將在4月1日正式推出。 我公司試劑盒產(chǎn)品操作方便，實(shí)驗(yàn)可靠。歡迎您致電我司業(yè)務(wù)員……
上海滬鼎生物科技有限公司
2015年03月30日