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冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子紅色熒光測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

 

主要用途

 

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子紅色熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑二氫溴化乙啶，在組織氧化損傷條件下，產(chǎn)生紅色熒光，來檢測(cè)冰凍組織內(nèi)超氧陰離子活性氧族的存在狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適宜于冰凍動(dòng)物組織的超氧陰離子分析。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，定性檢測(cè)，性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2^-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH^-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。二氫溴化乙啶（Dihydroethidium bromide；Hydroethidine；DHE）是一種*自由通過細(xì)胞膜，并在細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期滯留而不外漏的染色劑。一旦被超氧自由基陰離子氧化，二氫溴化乙啶轉(zhuǎn)化為溴化乙啶，進(jìn)入細(xì)胞核，與DNA緊密結(jié)合，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此證明細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子活性氧族的存在。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）     毫升

染色液（Reagent B）     微升

稀釋液（Reagent C）     毫升

產(chǎn)品說明書     1份

 

保存方式

 

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于染色孵育

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于觀察熒光組織細(xì)胞

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent C）置于室溫預(yù)熱。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為染色工作液，置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

 

• 準(zhǔn)備5片待測(cè)的厚為10微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
• 置于室溫下，小心加上xx微升預(yù)冷的清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升室溫預(yù)熱的染色工作液，鋪滿整個(gè)切片表面
• 在37℃濕潤(rùn)培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
• 小心移去切片上的染色工作液，避免光照
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下觀察（定性檢測(cè)）：激發(fā)波長(zhǎng)540nm，散發(fā)波長(zhǎng)590nm――紅色熒光增強(qiáng)，表明超氧陰離子含量高

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為20次操作
• 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時(shí)內(nèi)）制成的冰凍切片
• 操作時(shí)，須戴手套
• 染色工作液避免光照
• 孵育時(shí)，須避免光照
• 建議組織染色完成后，即刻進(jìn)行熒光定性分析
• 本公司提供系列活性氧檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰