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總抗氧化能力試劑盒說明書
閱讀：1315 發(fā)布時間：2022-8-19注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究 中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液 及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。 測定原理
在酸性環(huán)境下，物質(zhì)還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映 了其總抗氧化能力。
自備實驗用品 可見分光光度計、恒溫水浴鍋、低溫離心機、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制 提取液：液體 60mL×1 瓶，使用前預(yù)冷。 試劑一：液體 50mL×1 瓶，避光保存。 試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 試劑三：液體 5mL×1 瓶，避光保存。
樣品的制備 (1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品 血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心 10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超 30 d） 后再測定。
(2) 組織樣品 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 (3) 細胞樣品 按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞 加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g， 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
總抗氧化能力計算
1. 定義：樣品的抗氧化能力以達到同樣吸光度變化值（△A）所需的標(biāo)準(zhǔn)液離子濃度表示。 標(biāo)準(zhǔn)曲線為 y=0.6308 x +0.1291，R2=0.9989 2. 計算公式：
(1)按蛋白濃度計算 總抗氧化能力（U/mg prot）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣× Cpr） =53.9×（△ A-0.1291）÷ Cpr
(2)按樣品質(zhì)量計算 總抗氧化能力（U/g）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W） =53.9×（△ A-0.1291）÷ W (3)按細胞數(shù)量計算 總抗氧化能力（U/104 cell）=1÷0.6308×（△A-0.1291）×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細 胞數(shù)量（萬個）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 細胞數(shù)量（萬個） (4)按液體體積計算 總抗氧化能力（U/mL）=1÷0.6308×（△A-0.1291）× V 反總÷V 樣 =53.9×（△A-0.1291）÷ Cpr V 樣總：加入提取液體積，1 mL； V 反總：反應(yīng)總體積，1.02mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積， 0.03mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
注意事項 1. 試劑二對人體有刺激性，請采取適當(dāng)?shù)姆雷o措施。為了您的安全和健康，請穿實驗服并 戴乳膠手套操
2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑，否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)生 干擾。
3. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反 應(yīng)的還原劑。
4. 如果樣品測定出來的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍以外，需把樣品適當(dāng)稀釋或濃縮后再進行測 定。 5. 試劑盒 2-8℃保存。