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哈靈生物實(shí)驗(yàn)室教大家——免疫組化實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵

*免疫組化實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵是抗體，如果抗體不好，整個(gè)實(shí)驗(yàn)就基本上不會(huì)成功。如何選擇抗體成為免疫組化頭疼的問題，因?yàn)橐坏?shí)驗(yàn)不成功將浪費(fèi)我們辛苦收集來的樣本，今天讓上海哈靈生物實(shí)驗(yàn)室與您分享一下如何選擇抗體這個(gè)問題！

1、一抗質(zhì)量是酶免疫組化、免疫熒光和Western blotting等試驗(yàn)中的關(guān)鍵因素之一。從免疫組化選擇抗體來說，質(zhì)量的公司可能是Chemicon、upstate、Abcam、Dako公司等；從Western blotting選擇抗體來說，信價(jià)比的可能是Abcam公司，一般的都1ml，價(jià)格在2000元每株左右。而一抗訂購中選擇原則有1）選擇單克隆還是多克隆抗體，前者特異性好，而后者靈敏度高；2）選擇何種種屬來源？一般兔來源的多是多克??；而小鼠來源的多是單克隆，但也有另外。這也決定了你的二抗類型。3）檢測(cè)何種種屬的抗原，即species reactivity:Hu-human, Ms-mouse, Rat, Goat, Rb-rabbit, Shp-sheep等；這個(gè)很重要。4）抗體類型：IgG1/IgG2a/IgM?一旦一抗選為IgM，那么你二抗就必須是抗IgM；5)應(yīng)用范圍：WB, IP, IF, IHC(P), ELISA?一抗說明書中注明抗體可以應(yīng)用于western blotting、免疫沉淀、免疫熒光、免疫組化（石蠟切片）、ELISA等等，這根據(jù)你實(shí)驗(yàn)?zāi)康木駬瘛?）抗體公司的選擇，主要根據(jù)信價(jià)比的高低以及高質(zhì)量文獻(xiàn)數(shù)據(jù)支持。

2、二抗選擇：一般有生物素標(biāo)記、HRP標(biāo)記和熒光素標(biāo)記的二抗等多種。一抗種屬選擇好后，那么二抗只能是某種抗一抗種屬來源的抗體，如果是酶免疫組化，則可以選擇Bio-或HRP-標(biāo)記，可以買不同公司單獨(dú)的抗體，也可購買二抗染色試劑盒，包括二抗、SP等；而免疫熒光則可以選擇熒光素標(biāo)記的二抗，可以買美國Abcam公司等熒光素二抗，質(zhì)量還不錯(cuò)。后，建議大家可能還是在排除方法、切片中抗原有無等前提下來客觀、正確評(píng)價(jià)各種抗體的質(zhì)量。

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