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            技術(shù)文章

            冰凍切片組織線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品

            閱讀:1123          發(fā)布時(shí)間:2016-3-15

            保存方式

             

            保存染色液(Reagent B)在-20冰箱里,避免光照;其余的保存在4冰箱里;有效保證6月

             

            用戶自備

             

            1.5毫升離心管:用于染色工作液配制和組織細(xì)胞染色的容器

            培養(yǎng)箱:用于染色孵育

            (共聚焦)熒光顯微鏡:用于組織細(xì)胞熒光分析

             

             

            實(shí)驗(yàn)步驟

             

            實(shí)驗(yàn)開始前,將-20冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,中和液(Reagent C)放進(jìn)37恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液(Reagent B)到新的1.5毫升離心管,加入xx微升中和液(Reagent C),混勻后,標(biāo)記為染色工作液,置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

              

            • 準(zhǔn)備5片待測(cè)的厚為10微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
            • 置于室溫下,小心加上xx微升預(yù)冷的清理液(Reagent A),鋪滿整個(gè)切片表面
            • 小心移去切片上的清理液(Reagent A)
            • 小心加上xx微升室溫預(yù)熱的染色工作液,鋪滿整個(gè)切片表面
            • 在37濕潤(rùn)培養(yǎng)箱里,孵育30至60分鐘(注意:避免液體蒸發(fā)
            • 小心移去切片上的染色工作液,避免光照
            • 小心加上xx微升清理液(Reagent A),鋪滿整個(gè)切片表面
            • 小心移去切片上的清理液(Reagent A)
            • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7和8一次
            • 放上蓋玻片或封片
            • 即刻在(共聚焦)熒光顯微鏡下觀察(定性檢測(cè)):激發(fā)波長(zhǎng)488nm,散發(fā)波長(zhǎng)505nm――綠色熒光減弱,表明膜通道孔活性(MPTP)增強(qiáng)

            注意事項(xiàng)

             

            • 本產(chǎn)品為50次操作
            • 操作時(shí),避免污染母液
            • 操作時(shí),須戴手套
            • 建議使用新鮮組織(手術(shù)切除后1小時(shí)內(nèi))制成的冰凍切片
            • 染色前,所有試劑溶液,除染色液(Reagent B)外,需37℃預(yù)熱
            • 建議組織染色完成后,即刻進(jìn)行熒光檢測(cè)分析 
            • 孵育時(shí),必須避免光照
            • 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
            • 如果不具備505nm散發(fā)波長(zhǎng)的濾波器,可以使用505nm至530nm中的任一波長(zhǎng)
            • 本公司提供膜通道孔抑制劑: 0.2毫摩爾環(huán)胞素A(cyclosporine A)-12226,維護(hù)熒光完整
            • 本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品

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