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COVID-19的大流行讓病毒的氣溶膠傳播愈加引人關(guān)注。據(jù)報(bào)道，致病病毒能夠以氣溶膠的形式持續(xù)數(shù)小時(shí)，長(zhǎng)期存在于環(huán)境中。持續(xù)存在的病毒基因組甚至可以在釋放后24小時(shí)以上被檢測(cè)到。致病病毒也可通過空氣遠(yuǎn)距離傳播。因此，開發(fā)和改進(jìn)空氣樣品中病毒定量檢測(cè)的方法具有重要意義。
 

使用凝膠膜過濾器采集空氣中病毒

凝膠過濾法是監(jiān)測(cè)空氣中病原微生物和病毒的一種簡(jiǎn)便、高效、靈敏的方法，其中水溶性凝膠過濾器對(duì)于冠狀病毒采樣的適用性已經(jīng)得到了測(cè)試和證明。

- 凝膠過濾器的空氣采樣程序可將檢測(cè)下限擴(kuò)展至102個(gè)粒子/米，并能延長(zhǎng)采樣周期（高風(fēng)量采樣，如2000 l）

- 凝膠過濾器的過濾面積高達(dá)50cm²（Ø 80mm），流速高達(dá)50 l/min

- 溶劑體積最小可減少到80–100μl/cm²過濾面積，同時(shí)也支持較小的過濾器尺寸，如Ø47 mm（過濾面積17 cm²），因此溶劑體積可進(jìn)一步減少至1.5–2.0 ml）

- 這種高效率的病毒氣溶膠采樣是不需要進(jìn)行任何額外的準(zhǔn)備或后處理步驟的

凝膠過濾可以與輕便的便攜式AirPort® MD8采樣器配合使用，是一種特別適用于移動(dòng)應(yīng)用的方法。此外，采樣持續(xù)時(shí)間和30℃下80%–85%的相對(duì)濕度也不會(huì)對(duì)病毒的保留產(chǎn)生負(fù)面影響，平均保留率為99.76%。

值得一提的是，使用凝膠過濾器對(duì)人類致病病毒進(jìn)行采樣時(shí)，無需使用液體，因此大幅降低了分析檢測(cè)人員的感染風(fēng)險(xiǎn)。經(jīng)過凝膠過濾器采樣后的病毒傳染性有所降低，樣品可被認(rèn)為是非傳染性物質(zhì)。

使用凝膠膜過濾器進(jìn)行病毒PCR檢測(cè)

一旦將凝膠過濾器溶解于去離子水或任何其他適當(dāng)?shù)木彌_液或介質(zhì)中，所有保留在過濾器上的病毒顆?？墒褂肞CR進(jìn)行進(jìn)一步處理和檢測(cè)。

凝膠過濾與實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）相結(jié)合，甚至可以檢測(cè)到敏感的RNA物質(zhì)。

多項(xiàng)研究表明，使用凝膠過濾器進(jìn)行空氣采樣后再進(jìn)行PCR分析，可提供優(yōu)于其他檢測(cè)方法的回收結(jié)果。因此，可以認(rèn)為這是檢測(cè)空氣傳播病毒的一種精確可行的方法。

使用凝膠膜過濾器的典型空氣采樣程序以及PCR樣品制備

1. 打開Ø80 mm一次性凝膠過濾器的包裝（貨號(hào)17528--80----ACD）
2. 將一次性凝膠過濾器安裝在賽多利斯MD8空氣取樣器（AirPort MD8（貨號(hào)16757）或MD8 Airscan（貨號(hào)16748））的過濾器支架上
3. 應(yīng)避免觸摸過濾器而造成污染
4. 以50 l/min的速度開始空氣采樣，持續(xù)20分鐘（1000 l是典型的空氣采樣體積）
5. 取樣后，逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)過濾器支架，將其與一次性凝膠過濾器一起從MD8上拆下
6. 逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)過濾器支架，使其頂部與底座分離
7. 將Ø80 mm過濾膜插入15 ml的Falcon管中，需注意過濾膜很容易破損（也可選擇使用Ø47 mm的過濾膜）
8. 可選擇儲(chǔ)存和|或運(yùn)送至分析實(shí)驗(yàn)室
9. 分別加入4–5 ml或1.5–2 ml（對(duì)于Ø47 mm過濾器）溶劑（例如無菌去離子水或適當(dāng)?shù)木彌_介質(zhì)）
10. 在離心機(jī)中以3000×g離心
11. 37℃下，在加熱搖床（120 rpm）或加熱塊中孵育10分鐘，使凝膠溶解
12. 選擇性病毒滅活
13. 按照生產(chǎn)商的說明進(jìn)行RNA提取
14. 溶解RNA
15. 選擇性添加核糖核酸酶抑制劑
16. 立即在冰上處理或在-80℃下選擇儲(chǔ)存期
17. 使用帶有引物和dT oligo引物的商用試劑盒在熱循環(huán)器中反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
18. cDNA在-20℃下的選擇性儲(chǔ)存
19. 進(jìn)行PCR分析（如qPCR）

 

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 MD8 Airscan®空氣采樣器

凝膠過濾膜

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