脾臟淋巴細胞分離試劑盒的操作說明

規(guī)格：200 mL/kit

保存：本產(chǎn)品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期2 年。無菌開封后，保存于室溫。

試劑盒組成：

各種動物脾臟淋巴細胞分離液 200mL

全血及組織稀釋液 200mL

細胞洗滌液 200mL

淋巴細胞分離方法（僅供參考）

1. 制備脾臟的單細胞懸液。

2. 取一支適當?shù)碾x心管，加入與脾臟單細胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少于3 mL，總體

積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果）。

3. 小心吸取單細胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸

取單細胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。）

4. 室溫，水平轉子500~900g，離心20~30min。（根據(jù)脾臟單細胞懸液的量確定離心條件，單細胞

懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件可以自

行摸索，以達到最佳分離效果）。

5. 離心后，此時離心管中由上至下細胞分四層。第一層為稀釋

液層；第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層；第三層為透明分離液

層；第四層為紅細胞層。

6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細胞至另一潔凈的

15mL離心管中，向離心管中加入10ml細胞洗滌液洗滌白膜層細

胞，250g，離心10min。

7. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心

10min。

8. 重復步驟7

9. 棄上清，細胞重懸備用。

脾臟單細胞懸液的制備方法（僅供參考）

脾臟研磨的方法：

1. 無菌條件下摘取脾臟，撕去脾臟被膜，用眼科剪將脾臟剪成小塊。

2. 將尼龍篩網(wǎng)或者是細胞過濾篩放置于平皿上，加入少量全血及組織稀釋液（保證脾臟及獲得的

細胞處于液體環(huán)境中）。

3. 將脾臟放置于篩網(wǎng)上，使用注射器活塞或者是無菌鑷子來研磨脾臟（盡量控制研磨力度，保持

篩網(wǎng)懸空，避免在皿底上直接研磨而造成大批細胞死亡）

4. 研磨后使用全血及組織稀釋液沖洗篩網(wǎng)，收集細胞懸液，再經(jīng)濾網(wǎng)過濾。

注：

分層示意圖

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A. 可用酶消化法，使用膠原酶對脾臟組織進行消化，得到單細胞懸液。

B. 如果最終得到的細胞需要培養(yǎng)，那全過程所需試劑與器材均要求無菌。

C. 根據(jù)脾臟的體積控制單細胞懸液的濃度在108~109個/mL。

注意事項：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免

微生物污染。

B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是

溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。

C. 待分離的組織要求新鮮，避免冷凍和冷藏。

D. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。

E. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，那在制備單細胞懸液和分離過程中，注意無菌操作，避

免微生物污染。

脾臟淋巴細胞分離試劑盒的操作說明