各種動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞分離液 KIT

產(chǎn)品組成：

保存：室溫避光儲(chǔ)存，有效期至少 2 年。

產(chǎn)品簡介：

本分離液為Ficoll、淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時(shí)， 在Ficoll、淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降；此時(shí)，淋巴細(xì)胞及其他單個(gè)核細(xì)胞仍處于 分離液上層，紅細(xì)胞污染可忽略不計(jì)。大部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動(dòng)物多 種比重細(xì)胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng) 提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。

適用于從動(dòng)物抗凝血液中分離淋巴細(xì)胞，無菌條件下所分離的淋巴細(xì)胞可用于細(xì)胞培養(yǎng)等。本品僅供 科研使用。

注意事項(xiàng)： A．本實(shí)驗(yàn)要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時(shí)呈較 高密度，在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液復(fù)溫 至18-22℃。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在取血后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液提取后存放時(shí)間越長細(xì)胞活性 越低。 B．實(shí)驗(yàn)過程中，如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血 細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。 C．*抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會(huì)影響細(xì)胞活性。應(yīng)注意在血液稀 釋過程中去除抗凝劑體積。 D．實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過高的液體，手套中的粉末顆粒及高內(nèi)毒素會(huì)激 活淋巴細(xì)胞從而降低細(xì)胞得率及活性。 E．本實(shí)驗(yàn)不可使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁影響分離效 果。推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。 F．吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。 吸取過多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。 G．如需進(jìn)行B、T細(xì)胞計(jì)數(shù)，則需血液貯藏時(shí)間不得多于10小時(shí)，否則將導(dǎo)致細(xì)胞被激活，得率降低。 H．為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。 I．細(xì)胞純度可在步驟10后使用瑞氏染色方法確定，細(xì)胞活性可用臺(tái)盼藍(lán)處理后觀察。 J．由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào) 節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索*的分離條件（具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定）。 

分離?法：

一、當(dāng)血液樣本小于3ml時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下:

1.  取一支15ml離心管，加入3ml分離液置于18-22℃復(fù)溫。

2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃，400g離心20分鐘。低溫（如4℃）離心會(huì)降低細(xì)胞 得率。

3. 離心后，用吸管小心吸出分離液上層（包含淋巴細(xì)胞的細(xì)胞層）0.5cm以上的上清液部分，棄去。

4.  用吸管小心吸取分離液層及淋巴細(xì)胞層至于另一新離心管內(nèi)。

5. 在步驟4中所得離心管中加入10ml 細(xì)胞洗滌液混勻。

6. 250g離心10分鐘。

7.  棄上清。

8. 用吸管以5ml 細(xì)胞洗滌液重懸所得細(xì)胞。

9. 250g離心10分鐘。

10.  棄上清。重復(fù)步驟7、8、9，后以0.5ml后續(xù)試驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。 二、當(dāng)血液樣本大于3ml時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：

1. 當(dāng)血液樣本粘度過高或血液樣本大于等于3ml時(shí)，*稀釋方法：將血液于18-22℃以250g離心10分 鐘，棄去血漿，補(bǔ)充添加全血及組織稀釋液，添加量為所棄去血漿體積的1.5-2倍，混勻備用。注：不當(dāng)?shù)?稀釋方法會(huì)降低細(xì)胞得率及活性。

2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入分離液（加入量與稀釋后的血液樣本體積相等），置于18-22℃復(fù)溫。

3. 將經(jīng)稀釋處理的血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃，400g離心20分鐘。低溫（如4℃）離 心會(huì)降低細(xì)胞得率。注：加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二。

4.  剩余步驟同“情況一"中步驟3至步驟10。

產(chǎn)品性能指標(biāo)：

pH                                                   7.0-7.5

滲透壓                         280-340mOsmol/kg

內(nèi)毒素                         ≤0.5EU/ml

無菌                           直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清 澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下，

含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下

貯藏及保存期限：

本分離液是敏光型的，應(yīng)在18℃-25℃避光保存，有效期兩年。啟封后置4℃保存，溶液變渾濁或污染 細(xì)菌時(shí)，產(chǎn)品失效。保存溫度較低（10℃以下）時(shí)分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

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