促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素放免藥盒說明書
CRH RIA KIT
促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）由下丘腦神經(jīng)元合成，能刺激垂體促腎上腺皮質(zhì)細胞前
阿黑皮素原基因的表達和促腎上腺皮質(zhì)激素及其相關(guān)肽的合成與釋放。CRH 不僅在腦內(nèi)分布廣
泛，且人胎盤組織、羊膜、絨毛膜和蛻膜、大鼠胸腺和脾臟乃至植物血凝素刺激的人T 淋巴細
胞都可合成與分泌。人CRH 與大鼠CRH *同源，都為41 肽，與羊CRH 有7 個氨基酸殘基
不同。
試劑盒組成與配制：
1、CRH 標準品6 瓶，其濃度分別為0、1.5、5.0、15.0、45.0、135.0ng/ml。
2、125I-CRH 1 瓶。
3、CRH 抗體1 瓶。
4、緩沖液一瓶。
5、分離劑(第二抗體)一瓶。
樣本收集和提取：
1、靜脈血3ml，注入含0.5M EDTA-Na230ul 的試管中，混勻，離心，取血漿測定。
如貯于－20℃2-3 月內(nèi)測定不影響結(jié)果。
2、組織的提取：取大小適宜的組織塊，立即稱重后于煮沸的生理鹽水（1ml）中煮
沸3 分鐘，再加1Ｎ冰醋酸0.5ml 于勻漿器中勻漿提取,再用1ＮNaOH 0.5ml 中
和，離心3000 轉(zhuǎn)/分，30 分鐘(是低溫離心)。取上清液貯存于－20℃以下
待測樣本可保留2-3 個月。
測定操作步驟：
CRH RIA 操作程序加樣單位:ul
——————————————————————————————
試劑T NSB B0 S1-S8 標本
——————————————————————————————
緩沖液—— 200 —— —— ——
零標準—— —— 100 —— ——
標準液—— —— —— 100 ——
標本—— —— —— —— 100
抗體—— —— 100 100 100
125I-CRH 100 100 100 100 100
——————————————————————————————
混勻，4℃ 放置24 小時
——————————————————————————————
分離劑500 500 500 500 500
——————————————————————————————
混勻，室溫放置15 分鐘，3500 轉(zhuǎn)/分離心15 分鐘。棄上清，測沉淀計數(shù)(cpm)。
結(jié)果計算：
以N/T、B/T 計算NSB、S0 結(jié)合百分率，以B/B0 計算標準及待測物結(jié)合百分率，
在半對數(shù)座標紙上繪制標準曲線，并查出樣品值或由自動Υ-計數(shù)儀器直接讀出結(jié)果。
注意事項：
1、本月標準品每瓶用0.8 ml 緩沖液稀釋
2、本月藥盒抗體每瓶用5.0 ml 緩沖液稀釋
3、本月藥盒標記每瓶用5.5 ml 緩沖液稀釋
藥盒的技術(shù)指標：
1、靈敏度:≤ 3Pg/ml。
2、重復(fù)性:批內(nèi)cv< 8％,批間cv<12％。
3、回收率:平均回收率88％。
4、正常參考值：5.1±2.1 ng/ml
本月藥盒參考數(shù)據(jù)：
—————————————————————————————————————
T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
—————————————————————————————————————
CPM
—————————————————————————————————————
N/T% 2.1 B0/T% 35 B/ B0 % 94 82 65 38 19
———————————————————