在刑事化驗(yàn)工作中，經(jīng)常會(huì)遇到安眠藥篩選檢驗(yàn)，因?yàn)楦鞣N安眠藥經(jīng)常被犯罪分子用于麻醉搶劫、麻醉兇殺等。對(duì)于常見安眠藥的提取檢驗(yàn)，普遍采用的液-液提取法需根據(jù)藥物的性質(zhì)，在酸、堿條件下分別萃取凈化，操作費(fèi)時(shí)而且耗費(fèi)大量有機(jī)溶劑。相對(duì)液-液萃取法而言，固相萃取法操作簡(jiǎn)便，所用溶劑少，回收率高，凈化效果好，是很有前景的檢材前處理方法。本方法采用睿科 Fotector系列全自動(dòng)固相萃取儀和津楊GDX-403樹脂柱凈化尿液中的巴比妥和安定兩種常見安眠藥的固相萃取方法。
該方法操作簡(jiǎn)便，回收率高，*可以用于實(shí)際辦案中。
儀器、耗材
?？艶otector Plus / Fotector-02HT全自動(dòng)固相萃取儀
津楊GDX-403樹脂（400 mg/3mL）
Agilent 7890A/5975C氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀
色譜柱Agient HP-5M（50m×250μm×0.25μm）
離心機(jī)漩渦混勻器
甲醇、乙醇、無(wú)水乙醚均為分析純?cè)噭?/span>
實(shí)驗(yàn)用水直接使用自來(lái)水
樣品提取與前處理
樣品前處理
取尿樣2mL于離心管中，加入pH=6緩沖液5 mL，超聲5 min，1000 r/min離心15 min，將上清液置于樣品瓶中，GDX-403柱裝在全自動(dòng)固相萃取儀上，按圖1進(jìn)行固相萃取。洗脫液濃縮至干用乙醇定容至1mL，供GC/MS檢測(cè)。
固相萃取凈化條件
表-1. 固相萃取凈化條件
| 全自動(dòng)固相萃取儀 | ?？艶otector Plus 60位or Fotector-02HT |
| 固相萃取柱 | 津楊GDX-403樹脂（400 mg/3mL） |
| 淋洗 | pH 6.0 磷酸鹽緩沖液，水 |
| 洗脫 | 無(wú)水乙醚 |
樣品凈化步驟
以0.5 mL/min的速度上樣7 mL待測(cè)液，2 mL磷酸緩沖溶液潤(rùn)洗樣品瓶，吹干小柱10 min，后以3 mL的無(wú)水乙醚，以0.5 mL/min的速度洗脫樣品，氮吹濃縮至0.5 mL以下，定容至1 mL。詳細(xì)步驟見圖-1。
圖-1. Fotector Plus / Fotector-02HT 尿液中安眠藥固相萃取凈化方法
檢測(cè)條件
氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用條件
GC-MS檢測(cè)條件：進(jìn)樣口溫度290 ℃，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1.0mL；載氣為高純He氣，恒流模式，流速為1.0 mL/min；電子轟擊電離源（EI），離子源溫度230 ℃，接口（傳輸線）溫度280 ℃，質(zhì)量分析器溫度150 ℃，全掃描模式（Scan），電子倍增器檢測(cè)電壓1576 V。
GC程序升溫程序：初始溫度50 ℃，保持1 min；以20℃/min速度升溫至150℃，保持2 min；以10℃/min速度升溫至300℃，保持5 min。
定量離子及保留時(shí)間
表-2. 2種安眠藥的保留時(shí)間及離子碎片
| 項(xiàng)目 | CAS | 保留時(shí)間 | 離子碎片 | |
| 巴比妥 | Barbital | 57-44-3 | 10.218 | 156，141 |
| 安定 | Diazapam | 439-14-5 | 20.324 | 256，283 |
標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖
圖-2. 2種安眠藥的色譜圖（2 μg/L）
方法可行性驗(yàn)證
基質(zhì)影響
圖-3中標(biāo)準(zhǔn)品和空白基質(zhì)加標(biāo)的全掃描疊加圖可以看出，尿樣基質(zhì)非常復(fù)雜，采用全掃描干擾嚴(yán)重。采用SIM模式，樣品基質(zhì)對(duì)測(cè)定干擾較?。▓D-4），巴比妥156的檢測(cè)幾乎沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)，但是安定化合物256處有一定的基質(zhì)抑制作用，導(dǎo)致樣品響應(yīng)值有所下降。故采用基質(zhì)工作標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，以免基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生影響。
圖-3. 尿樣基質(zhì)加標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)品全掃描疊加圖（黑色，標(biāo)準(zhǔn)品；藍(lán)色，樣品加標(biāo)）
圖-4. 尿樣基質(zhì)加標(biāo)和巴比妥選擇離子（156，左）安定選擇離子（256，右）掃描疊加圖掃描疊加圖（黑色標(biāo)品，藍(lán)色為樣品加標(biāo)）
樣品加標(biāo)回收率測(cè)試
在2 μg/mL的加標(biāo)水平下，樣品經(jīng)過(guò)前處理提取，萃取后，用Fotector plus/Fotector-02HT全自動(dòng)固相萃取儀凈化，巴比妥的回收率在91.2~96.7%之間，RSD=2.4%（n=3），安定的回收率在74.3~85.2%之間，RSD=5.7%（n=3），*公安系統(tǒng)檢測(cè)對(duì)回收率的要求，回收率如表-3所示：
表-3. 加標(biāo)回收率（%）
| 化合物 | 定量離子 | R1 | R2 | R3 | Avg | RSD |
| 巴比妥 | 156 | 94.6 | 91.2 | 96.7 | 94.2 | 2.4 |
| 安定 | 256 | 78.2 | 74.3 | 85.2 | 79.2 | 5.7 |
結(jié)果與討論
采用GDX403樹脂萃取柱，通過(guò)?？?/span>Fotector系列全自動(dòng)固相萃取儀凈化和氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)，對(duì)尿樣中巴比妥和安定的檢測(cè)，可取得較好的結(jié)果，*適用于公安系統(tǒng)實(shí)際辦案中。
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