背景
蛋白質(zhì)組學本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,包括蛋白質(zhì)的表達水平、亞細胞定位、翻譯后的修飾、蛋白與蛋白相互作用等,由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關于疾病發(fā)生、細胞代謝、生長發(fā)育以及各種脅迫反應等過程的整體而全面的知識。
隨著生物質(zhì)譜技術迅速發(fā)展,質(zhì)譜技術已經(jīng)逐漸成為了蛋白質(zhì)組學分析的主流技術。質(zhì)譜儀器具有高靈敏度、高分辨率等特點,樣本前處理的質(zhì)量和可重復性顯著影響質(zhì)譜儀的分離和鑒定能力。
蛋白質(zhì)組學樣本前處理流程復雜、處理時間長(傳統(tǒng)蛋白質(zhì)組前處理需過夜),造成了樣品前處理不穩(wěn)定、樣品質(zhì)量參差不齊,重現(xiàn)性差等問題,急需一種高效、高回收率、抗干擾能力強的蛋白質(zhì)組學分析的前處理方法。
蛋白質(zhì)組學分析流程
產(chǎn)品介紹
??萍瘓F全新推出的蛋白組學樣本前處理試劑盒,其中的關鍵組分是一種新型固相烷基化試劑,與傳統(tǒng)的烷基化試劑相比,采用新型固相烷基化試劑,蛋白質(zhì)可與其它小分子(如糖、鹽、表面活性劑、脂類等)實現(xiàn)快速分離,提高蛋白質(zhì)的純度,顯著降低樣本復雜程度。同時,試劑表面親水性較好,可顯著提高蛋白質(zhì)或酶解產(chǎn)物的回收率。產(chǎn)品適用于處理各種來源的蛋白質(zhì)組樣品,如細胞、血漿、細菌、腫瘤組織等
??频鞍捉M學樣本前處理試劑盒
(新型固相烷基化試劑)
產(chǎn)品特點
一、高效
操作簡便、高效,一站式覆蓋蛋白質(zhì)組提取到消化的所有步驟
二、高回收率
蛋白質(zhì)組處理回收率高,可滿足納克至微克級別蛋白質(zhì)組樣品的處理需求
三、抗干擾
抗干擾能力強,對樣品中表面活性劑、有機試劑、各種酸堿緩沖溶液等均可耐受
四、適配自動化
除手動操作外,可適配??谱詣踊疤幚碓O備
產(chǎn)品測試數(shù)據(jù)
使用試劑盒對293T細胞處理后進行重復性驗證
材料:用 6M 鹽酸胍超聲裂解 293T 細胞離心獲得
實驗方法:隨機選取2批次試劑,將同一樣品分為6份,每批次試劑各做3個平行樣品,使用蛋白組學樣本前處理試劑盒流程處理后,將樣品進行Q Exactive質(zhì)譜檢測。
Q Exactive質(zhì)譜檢測結果如下:
表1:不同批次前處理試劑處理293T蛋白樣品QE質(zhì)譜檢測蛋白數(shù)及零漏切率
圖1:不同批次試劑處理293T蛋白樣品質(zhì)譜檢測重復性Pearson Correlation Coefficient均>0.99
使用試劑盒對E. coli 樣本處理后進行重復性驗證
材料:用 6M 鹽酸胍超聲解 E. coli 離心獲得
實驗方法:隨機選取2批次試劑,將同一樣品分為6份,每批次試劑各做3個平行樣品,使用蛋白組學樣本前處理試劑盒流程處理后,將樣品進行Q Exactive質(zhì)譜檢測。
Q Exactive質(zhì)譜檢測結果如下:
表2:不同批次前處理試劑處理E.coli蛋白樣品QE質(zhì)譜檢測蛋白數(shù)及零漏切率
圖2:不同批次試劑處理E.coli 蛋白樣品質(zhì)譜檢測重復性Pearson Correlation Coefficient均>0.99
■ 實驗總結
對293T 細胞和E. coli 樣本分別用兩批次試劑進行前處理,批間的重復性測試表明可檢測到的蛋白數(shù)及零漏切率基本一致,達到預期要求;檢測結果皮爾斯相關系數(shù)介于0.991-0.996之間。說明不同批次試劑實驗結果重復性好。
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