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mRNA 轉(zhuǎn)染是一種新的解決方案，適用于各種難以用質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，包括貼壁細(xì)胞（神經(jīng)元或原代細(xì)胞）和懸浮細(xì)胞（淋巴細(xì)胞）。與 DNA 轉(zhuǎn)染相比，該過程具有許多優(yōu)點(diǎn)：轉(zhuǎn)染細(xì)胞的百分比高，轉(zhuǎn)染后蛋白質(zhì)表達(dá)速度更快，與質(zhì)?；虿《据d體相比，沒有插入誘變的風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)際上，mRNA 在細(xì)胞質(zhì)中傳遞和表達(dá)，不需要穿過核膜，這是質(zhì)粒轉(zhuǎn)移的限制步驟之一。此外，新一代修飾的 mRNA 降低了通常由 mRNA 進(jìn)入胞質(zhì)溶膠誘導(dǎo)的毒性和免疫反應(yīng) (1, 2)。 mRNA 轉(zhuǎn)染的瞬時(shí)特性對于許多應(yīng)用來說是理想的，包括細(xì)胞重編程、基因組編輯 (CRISPR/Cas9) 和疫苗。 Polyplus-transfection® 開發(fā)了一種新型 mRNA 轉(zhuǎn)染試劑 -jetMESSENGER®，其效率優(yōu)于 DNA 轉(zhuǎn)染效率。

Fig1.  Mechanism of transfection of jetMESSENGER

接下來小編好好給你介紹一下

1.好的轉(zhuǎn)染效率：mRNA轉(zhuǎn)染優(yōu)于DNA轉(zhuǎn)染效率

Fig2.在用 jetMESSENGER® 轉(zhuǎn)染 EGFP mRNA (L-6101, Trilink™) 或用 Lipofectamine® 2000 轉(zhuǎn)染 EGFP (pCMV-EGFP) 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后，通過 FACS 分析在癌細(xì)胞系中測定轉(zhuǎn)染效率。

Fig3.轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)，通過熒光顯微鏡在 Hep G2 細(xì)胞中測定 GFP 表達(dá)。 在使用jetMESSENGER® 轉(zhuǎn)染期間保持細(xì)胞形態(tài)。

jetMESSENGER® 優(yōu)于競爭對手的DNA和mRNA轉(zhuǎn)染產(chǎn)品:

Fig4.在用 jetMESSENGER® 或 Lipofectamine® MessengerMax™ 轉(zhuǎn)染 EGFP mRNA (L-6101, Trilink™) 24 小時(shí)后，通過 FACS 分析在懸浮細(xì)胞中測定轉(zhuǎn)染效率。

2.對多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞有效：適用于緩慢分裂的處于靜止期的原代細(xì)胞/干細(xì)胞

Fig5.在用 jetMESSENGER® 轉(zhuǎn)染 mRNA 后，通過熒光顯微鏡在各種細(xì)胞系中測定 GFP 表達(dá)

3.對細(xì)胞極其溫和：維持良好的細(xì)胞活率

Fig6.a.在用 jetMESSENGER® 轉(zhuǎn)染 EGFP mRNA (L-6101, Trilink™) 或用 Lipofectamine® 3000 轉(zhuǎn)染 EGFP (pCMV-EGFP) 的質(zhì)粒 DNA 后 24 小時(shí)或 48 小時(shí)，通過 FACS 在人星形膠質(zhì)細(xì)胞中分析 GFP 表達(dá)。b.在用 jetMESSENGER® 或 Lipofectamine® MessengerMaxTM 轉(zhuǎn)染 EGFP mRNA（L-6101，Trilink™）后 24 小時(shí)、48 小時(shí)、72 小時(shí)或 96 小時(shí)，通過 FACS 在人成纖維細(xì)胞中分析 GFP 表達(dá)。

Fig7.通過熒光顯微鏡在各種來源的人類癌細(xì)胞、MDA-MB-231（乳腺細(xì)胞）和 SW1353（人類骨成纖維細(xì)胞）中測定 GFP 表達(dá)。

4.適合眾多應(yīng)用：可用于基因表達(dá)，CRISPR基因編輯，iPS誘導(dǎo)和其他應(yīng)用

接著我們來看看-jetMessenger在神經(jīng)元轉(zhuǎn)染上的具體應(yīng)用

為了提高功能和生化分析等不同應(yīng)用的轉(zhuǎn)染效率，在不同類型的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了 eGFP mRNA。 如Fig8所示，獲得了高于40% 的海馬和皮質(zhì)大鼠原代神經(jīng)元的高轉(zhuǎn)染率。 此外，從 iPS 細(xì)胞獲得的多巴神經(jīng)元實(shí)現(xiàn)了高轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果表明jetMESSENGER® 是研究重編程和分化的非常強(qiáng)大的工具。 對于人類正常的星形膠質(zhì)細(xì)胞，獲得了幾乎 100% 的轉(zhuǎn)染效率（Fig.8）。

Fig8. 使用 jetMESSENGER® 轉(zhuǎn)染不同類型的神經(jīng)元。 (A) 用 jetMESSENGER® 轉(zhuǎn)染編碼 eGFP (EGFP-mRNA) 的 mRNA，并通過熒光顯微鏡評估轉(zhuǎn)染后 4 小時(shí)的 eGFP 表達(dá)。 (B) 星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)通過流式細(xì)胞儀分析評估轉(zhuǎn)染效率。 對于皮質(zhì)、海馬和多巴神經(jīng)元，使用熒光細(xì)胞成像儀進(jìn)行熒光顯微鏡分析。

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