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如何將自然界中的生物發(fā)光現(xiàn)象運(yùn)用到報(bào)告基因中？
對于自然界中的生物發(fā)光現(xiàn)象，大家應(yīng)該都是比較熟悉的，其廣泛存在于海洋生物、微生物和陸生生物中。生物發(fā)光現(xiàn)象其實(shí)是在生物體內(nèi)由于生命過程中由化學(xué)反應(yīng)介導(dǎo)的將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能所產(chǎn)生的，這其中起到主要作用的是一種叫熒光素酶的物質(zhì)。熒光素酶是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，具代表性的是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，被廣泛應(yīng)用到生物學(xué)的報(bào)告基因中—一類可以編碼熒光蛋白或酶，從而將看不見的底物轉(zhuǎn)化為發(fā)光或彩色產(chǎn)物的一類基因報(bào)告系統(tǒng)，光信號(hào)可通過發(fā)光檢測儀或CCD相機(jī)進(jìn)行檢測，是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)研究的一個(gè)重要工具，廣泛應(yīng)用于檢測細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)。
原理解析
螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶雖然同屬于熒光素酶，但是它們的來源及發(fā)光原理、發(fā)光顏色、檢測波長等都不盡相同。
表1 兩種熒光素酶作用原理的區(qū)別
| 螢火蟲熒光素酶 | 海腎熒光素酶 | |
| 來源 | 從螢火蟲中分離得到 | 從海腎中分離得到 |
| 分子量 | 61 kDa | 36 kDa |
| 底物和輔因子 | 熒光素、氧氣、ATP和鎂離子 | 腔腸素和氧氣 |
| 發(fā)光顏色 | 黃綠色 | 藍(lán)色 |
| 檢測波長 | 550-570nm | 480nm |
螢火蟲熒光素酶發(fā)光原理：
海腎熒光素酶發(fā)光原理：
利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的特性，可以把感興趣的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件克隆在熒光素酶基因的上/下游，構(gòu)建成熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，經(jīng)適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調(diào)控元件的影響。
圖2 熒光素酶報(bào)告基因檢測流程圖
由于螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的底物和發(fā)光顏色不同，并且易于定量，檢測靈敏度高，所以在雙報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)中得到廣泛應(yīng)用。在雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)中螢火蟲熒光素酶一般是作為主報(bào)告基因， 海腎熒光素酶通常作為內(nèi)參報(bào)告基因，來標(biāo)定檢測用報(bào)告基因的測量結(jié)果，從而達(dá)到有效地減少實(shí)驗(yàn)誤差的目的。
新品上市
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | abs60341 | 100/1000T |
| Firefly & Renilla Assay Kit |
愛必信雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒為檢測基因的表達(dá)量提供有效的手段，在 DLR檢測中，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）的活性可在單個(gè)樣品中依次檢測。先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時(shí)加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測。
產(chǎn)品優(yōu)勢
兼容性好：本試劑盒的光信號(hào)可以兼容化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測定儀進(jìn)行測定。
準(zhǔn)確性高：系統(tǒng)包含海腎熒光素，可校正孔間細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率、以及細(xì)胞生長狀態(tài)造成的誤差，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
抗干擾性強(qiáng)：無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾。
除以上介紹的雙熒光素酶報(bào)告試劑盒外我們提供多種熒光素酶檢測試劑盒、轉(zhuǎn)染試劑盒，以滿足不同用戶的使用需求。具體信息如下：
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| abs60342 | 螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 50T/200T/1000T |
| abs60343 | 海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 50T/200T/1000T |
| abs60344 | 一步法螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 50T/200T/1000T |
| abs60252 | 小核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60253 | PM原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60254 | SP懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60255 | 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒（貼壁細(xì)胞） | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60256 | PM原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60257 | 溶液A（轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑，僅用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染） | 0.25ml/0.5ml/1ml |
| abs60258 | Elite Fect-I小核酸活體組織轉(zhuǎn)染試劑（小鼠轉(zhuǎn)染） | 3只/6只 |
| abs60259 | 核酸轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60317 | 核酸共轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60322 | Lipofect5000 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml/1.0ml |
| abs60324 | PM原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60325 | SP懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
| abs60327 | SP懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
關(guān)鍵詞：雙熒光素酶；發(fā)光；報(bào)告基因
上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司
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