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            如何快速啟動(dòng)siRNA文庫(kù)篩選

            閱讀:413        發(fā)布時(shí)間:2023-1-31

            客戶:小刀,我之前有聽(tīng)過(guò)你的siRNA文庫(kù)講座,還挺感興趣的
            客戶:但是我們實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有高通量?jī)x器,也可以做siRNA文庫(kù)篩選嗎?會(huì)不會(huì)太麻煩?
            DAO:不會(huì)很麻煩,小幾十個(gè)基因的篩選排槍就能搞定,高通量?jī)x器一般適用于幾百、幾千或幾萬(wàn)個(gè)基因的篩選


            客戶:之前沒(méi)做過(guò)siRNA篩選,我有點(diǎn)怕我操作不好
            DAO:這個(gè)不用太擔(dān)心,基本的轉(zhuǎn)染操作和單基因一致,只不過(guò)通常是用96孔細(xì)胞板進(jìn)行,所以需要多些細(xì)心和耐心


            客戶:好的,那我可以試試看
            客戶:對(duì)了,你講座中提到的成品文庫(kù),我看了下,這些基因家族分類和我想要研究的方向不能夠完mei匹配呢
            DAO:你說(shuō)的是這些亞庫(kù)嘛?
             
            DAO:這個(gè)問(wèn)題不大,圖中所有文庫(kù)的基因列表我都有,你可以看看你的研究方向和哪套庫(kù)靠的上,然后挑選自己喜歡的基因進(jìn)行定制。又或者你自己有想要研究的一些基因,可以直接發(fā)我,畢竟只要有5個(gè)基因就能定制文庫(kù)了,價(jià)格還劃算


            客戶:能定制還蠻不錯(cuò)的,那我來(lái)看看能不能湊些基因出來(lái)給你
            客戶:但是定制的規(guī)格、產(chǎn)品形式又是什么樣的?是不是和成品不一樣啊?
            DAO:基本是一樣的,但是定制更靈活:規(guī)格上有0.1, 0.25, 0.5, 1, 2 nmol 5種可選,siRNA你可以選擇4條分裝的,也可以選擇SMARTpool形式的


            客戶:等等等,什么叫4條分裝,SMARTpool又是什么?
            DAO:哈哈,講座沒(méi)認(rèn)真聽(tīng)吧,是這樣的,每個(gè)基因我們會(huì)提供4條不同的siRNA,4條分裝就是每條siRNA單獨(dú)放1個(gè)孔里,那SMARTpool就是把4條siRNA預(yù)混后共同放在1個(gè)孔里


            客戶:那我要怎么選???哪種更合適呢?
            DAO:做多個(gè)基因篩選的話,我是更建議選SMARTpool的,這樣你的轉(zhuǎn)染工作量就減少了3/4,而且SMARTpool沉默效果更好,畢竟4條不同的siRNA共同發(fā)揮作用,大哥不行還有二哥、三哥和四哥呢


            客戶:那沉默效率怎樣?有沒(méi)有做過(guò)驗(yàn)證啊?萬(wàn)一效果不好怎么辦?
            DAO:這個(gè)可以放心,所有的siRNA出廠前都有做過(guò)驗(yàn)證,而且是有沉默效率保障的,保證每個(gè)基因?qū)?yīng)的4條siRNA中至少有3條在mRNA水平上有≥75%的沉默效率,如果效果不好,提供陰陽(yáng)性對(duì)照、siRNA的qPCR數(shù)據(jù),廠家是會(huì)賠付的


            客戶:OKK,那這個(gè)規(guī)格我咋選呢,我是想買個(gè)0.1nmol的,但是具體能做幾次篩選我有點(diǎn)慌?
            DAO:和我想到一起去了,如果只是利用文庫(kù)做一下基因的初篩,那0.1nmol就很夠用了
            DAO:關(guān)于能做幾次篩選,這個(gè)取決于你最終轉(zhuǎn)染時(shí)siRNA的使用終濃度了。以96孔板篩選,25nM終濃度,每個(gè)基因3個(gè)復(fù)孔為例,大概可以支持個(gè)10次篩選左右


            客戶:這樣啊,那0.1nmol確實(shí)夠用了,篩到以后,我再單獨(dú)購(gòu)買大規(guī)格的siRNA就是了,沒(méi)必要篩選的時(shí)候就買那么多,不劃算
            DAO:對(duì)的,就是這個(gè)意思


            客戶:行,那我了解了,我現(xiàn)在就去找找基因去,你把泛素化集合相關(guān)的基因列表發(fā)我,我看看選一些,再把我手頭上有的基因列一列,到時(shí)發(fā)你
            DAO:好噠,這是基因列表,請(qǐng)查收
             
            客戶:謝謝

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